论著
王琪雯, 赵璐璐, 元晓荣, 高 原, 王鲁豫, 张春生, 谷 超, 李 刚
目的 研究氯化镧（LaCl3）对高磷诱导的人血管平滑肌细胞（hVSMC）钙化的抑制作用及其机制。方法 采用高磷诱导hVSMC钙化模型。将对数生长期的hVSMC随机分为细胞对照组、LaCl3 60 μmol∙L-1组、高磷模型组（磷酸盐缓冲液3 mmol∙L-1）、模型+氯化钠（NaCl）180 μmol∙L-1组、模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组、模型+二甲基乙二酰氨基乙酸（DMOG）100 μmol∙L-1+LaCl3 60 μmol∙L-1组、模型+焦磷酸盐（PPI）100 μmol∙L-1组。hVSMC给予磷酸盐缓冲液3 mmol∙L-1孵育6 d造模，第4天，按分组给予相应药物孵育2 d。茜素红染色法及Von Kossa染色法检测细胞钙沉积；试剂盒检测细胞内钙含量和碱性磷酸酶（ALP）活性；荧光染色法检测细胞内活性氧（ROS）含量；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测细胞平滑肌蛋白22α（sm22α）、骨形态发生蛋白2（bmp-2）、成骨相关转录因子2（runx2）和血管内皮生长因子（vegf）mRNA表达水平； Western印迹法检测细胞质低氧诱导因子1α（HIF-1α）、VEGF、SM22α和BMP-2及细胞核Runx2和HIF-1α蛋白表达水平。结果 茜素红染色结果显示，与细胞对照组相比，高磷模型组细胞钙沉积明显升高（P<0.01）；与高磷模型组相比，模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组细胞钙沉积明显降低（P<0.05，P<0.01）。Von Kossa染色结果显示，高磷模型组细胞黑色沉积物呈现大量聚集并广泛分布；模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组黑色沉积物有所减少。与细胞对照组相比，高磷模型组细胞内钙含量和ALP活性均明显升高（P<0.01）；与高磷模型组相比，模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组细胞内钙含量和ALP活性均显著降低（P<0.05，P<0.01）；与模型+LaCl3 60 μmol∙L-1组相比，模型+DMOG+LaCl3 60 μmol∙L-1组细胞钙含量及ALP活性均显著升高（P<0.01）。ROS检测结果显示，与细胞对照组相比，高磷模型组ROS含量显著增加（P<0.01）；与高磷模型组相比，模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组ROS含量显著减少（P<0.05，P<0.01），而与模型+LaCl3 60 μmol∙L-1组相比，模型+DMOG+LaCl3 60 μmol∙L-1组ROS含量显著增加（P<0.05）。RT-qPCR结果显示，与细胞对照组相比，高磷模型组sm22α mRNA表达水平显著下降（P<0.01），bmp-2，runx2和vegf mRNA表达水平显著升高（P<0.01）；与高磷模型组相比，模型+LaCl3 15，30和60 μmol∙L-1组sm22α mRNA表达水平显著升高（P<0.05，P<0.01），bmp-2，runx2和vegf mRNA表达水平显著下降（P<0.05，P<0.01）。Western印迹结果显示，与细胞对照组相比，高磷模型组细胞胞质内VEGF和BMP-2蛋白表达水平明显升高（P<0.01），HIF-1α及SM22α蛋白表达水平明显降低（P<0.01）；细胞核内HIF-1α和Runx2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。与高磷模型组相比，模型+LaCl3 30和60 μmol∙L-1组细胞质内VEGF和BMP-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），HIF-1α和SM22α蛋白表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；细胞核HIF-1α和Runx2蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论 LaCl3可抑制高磷诱导的hVSMC中ROS生成，并可通过阻断HIF-1信号通路发挥抑制高磷诱导的hVSMC钙化的作用。
