目的  研究多巴胺3型受体（D₃R）对强烈电击诱发恐惧记忆的影响及其可能的神经生物学机制。方法  ① 以野生型（WT）和D₃R敲除（D₃R^-/-）小鼠为研究对象，用足底热辐射法以缩足反应潜伏期（PWL）为观察指标评价WT和D₃R^-/-小鼠足底基础痛阈值，以排除痛阈值差别对强烈电击效果的影响。② 将WT和D₃R^-/-小鼠分别分为对照组和模型组，第1天模型组施予不可逃避性足底电击（1.5 mA，持续10 s，间隔10 s，共15次），对照组不施予电击。于第2，7，10，14和16天进行情景恐惧测试，通过计算僵住时间（FT）百分率反映环境线索诱发的恐惧记忆形成；于环境线索诱发的恐惧反应消退后（第17天）再次给予模型组低强度电流（0.5 mA， 持续10 s，间隔10 s，共15次）刺激进行恐惧记忆唤起，对照组不施予电击，第18天进行情景恐惧测试，通过观察FT百分率反映环境线索诱发的恐惧记忆唤起。③ 另一批WT和D₃R^-/-小鼠，分组和处理同②，运用光纤记录技术检测电击时WT和D₃R^-/-小鼠中脑腹侧被盖区（VTA）多巴胺（DA）能神经元钙荧光信号实时动力学变化，以曲线下面积（AUC）为指标量化DA能神经元兴奋性。结果 ① 与WT小鼠相比，D₃R^-/-小鼠PWL无显著变化。② 与WT对照组相比，WT模型组在电击后第2，7，10和14天FT百分率均显著增加（P<0.05）；与D₃R^-/-对照组相比，D₃R^-/-模型组仅在电击后第2和7天FT百分率显著增加（P<0.01）。与WT模型组小鼠相比，D₃R^-/-模型组小鼠在电击后第2，7，10和14天FT百分率均显著减少（P<0.05，P<0.01）。在唤起阶段（第18天），与各自对照组相比，WT模型组和D₃R^-/-模型组（P<0.05）小鼠FT百分率均显著增加（P<0.05，P<0.01），而D₃R^-/-模型组FT百分率显著低于WT模型组小鼠（P<0.01）。③ 在电击过程中，WT模型组和D₃R^-/-模型组小鼠VTA中DA 能神经元钙信号在电击前2 s内均迅速升高，在电击2~10 s时间段内钙信号均缓慢下降，而D₃R^-/-模型组小鼠在2~10 s时间段内的AUC显著低于WT模型组（P<0.05）。结论  D3R敲除抑制小鼠长期恐惧记忆的形成和唤起，其神经生物学机制可能与电击时DA能神经元兴奋性降低相关。

目的   探讨人参皂苷类P糖蛋白（P-gp）底物与紫杉醇联用对结肠癌Caco-2细胞增殖和迁移能力的影响。方法  采用生物层干涉技术检测人参皂苷与P-gp的亲和力常数；采用网络分子对接预测人参皂苷与P-gp的亲合力；Caco-2细胞分为紫杉醇（0，6.25，12.5，25，50，100和200 mg·L^-1）组、人参皂苷Rg3 （0，6.25，12.5，25，50，100和200 mg·L^-1）组及紫杉醇（5 mg·L^-1）+人参皂苷Rg3（0，25，50，100和200 mg·L^-1）组，分别与相应浓度化合物于37 ℃孵育48 h后，MTT法检测Caco-2细胞增殖抑制率，用“一带一线”法定量评价两药联用的相互作用；Caco-2细胞分为细胞对照组、紫杉醇 5 mg·L^-1 组、人参皂苷Rg3 50和100 mg·L^-1组及紫杉醇 5 mg·L^-1+人参皂苷Rg3 50和100 mg·L^-1组，分别与相应浓度化合物于37 ℃孵育24 h后，分别采用集落实验及Transwell迁移实验检测细胞增殖和迁移能力；Caco-2细胞分为细胞对照组、奎尼丁12.5 mg·L^-1组及人参皂苷Rg3 6.25和12.5 mg·L^-1组，分别与相应浓度化合物于37 ℃孵育4 h后，采用 ELISA检测P-gp及总蛋白表达量。结果  人参皂苷Rb1，Rg3和Rg5与P-gp的亲和力常数均小于10^-3  mol·L^-1，人参皂苷CK与P-gp的亲和力常数是10^-2  mol·L^-1，人参皂苷Re与P-gp没有典型的结合解离曲线；人参皂苷Rg3，Rg5与P-gp的亲合力绝对值分别为8.5 和7.6 kcal·mol^-1；人参皂苷Rg3与紫杉醇（5 mg·L^-1）联用通过协同及相加的方式抑制结肠癌细胞增殖，其中协同效应的剂量范围是[0+5， 43.15+5] mg·L^-1和[164.51+5，200+5] mg·L^-1，相加效应剂量的范围是[43.15+5，164.51+5] mg·L^-1；与紫杉醇单用相比，两药联用后Caco-2细胞的增殖与迁移能力显著降低（均P<0.01）；与细胞对照组相比，人参皂苷Rg3 6.25和12.5 mg·L^-1组及奎尼丁12.5 mg·L^-1组细胞总蛋白和P-gp表达量均显著降低（P<0.05）。结论  人参皂苷通过与P-gp结合并抑制其活性，与紫杉醇协同降低Caco-2细胞的增殖和迁移能力。人参皂苷与紫杉醇联用增强了紫杉醇抑制Caco-2细胞的敏感性。两物质联合使用有望达到比单用紫杉醇更好的抗癌效果。

目的  建立基于实时定量聚合酶链式反应（qPCR）的高灵敏度检测方法，定量分析基因治疗药物VGM-R02b（腺相关病毒9载体）在食蟹猴体内组织分布特征。方法  利用VGM-R02b质粒标准品构建qPCR标准曲线，优化扩增程序等关键参数并验证方法的定量范围、精密度、准确度、稀释线性、选择性、特异性及样本稳定性。单次单侧脑室注射VGM-R02b后，于给药后第29天（D29）和第92天（D92）采集食蟹猴全血及多组织样本，检测目的基因含量并分析其组织分布特点。结果  建立了定量检测食蟹猴体内VGM-R02b目的基因的qPCR方法并完成了方法学验证。该方法定量范围为5.00×10⁹~5.00×10¹ copies·μg^-1 DNA，R²≥0.9989，精密度、准确性、稀释线性、选择性和特异性均良好。目的基因在食蟹猴组织（以肝为例）中经室温放置4 h、-15~-25 ℃放置9 d、反复冻融5次、-60~-80 ℃放置90 d，在食蟹猴全血中经室温放置4 h、-15~-25 ℃放置9 d，反复冻融5次、-60~-80 ℃放置93 d及提取的核酸样本经室温放置4.25 h、2~8 ℃放置24.16 h、反复冻融5次、-60~-80 ℃放置109 d均保持稳定。基于qPCR定量检测结果显示，给药后D29和D92，对照组均未检测出目的基因，给药组目的基因分布于所有组织，其中脑、肝、脾和脊髓分布较高。与D29相比，D92所有组织中目的基因含量均无显著变化。结论  建立的qPCR方法稳健可靠，可用于定量检测食蟹猴体内VGM-R02b目的基因含量。VGM-R02b给药后D29和D92目的基因分布于所有组织，其中脑、肝、脾和脊髓中分布较高。

目的  采用新型程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）单抗（GLS-010）在食蟹猴体内的药动学（PK）数据构建群体药动学（PopPK）模型，预测GLS-010在人体的PK特征。方法  食蟹猴58只，其中18只食蟹猴随机分为3组，分别单次静脉滴注GLS-010 2，6和18 mg·kg^-1，其余40只食蟹猴随机分为4组，分别多次静脉滴注给予GLS-010 0，5，25和100 mg·kg^-1，每周1次（qw），连续5次。分别于给药前和给药后进行血样采集，采用ELISA检测食蟹猴血清GLS-010浓度，超敏电化学发光法测定食蟹猴血清中抗药抗体（ADA）浓度，获得GLS-010在食蟹猴体内的PK数据，绘制GLS-010在食蟹猴体内的药-时曲线，并通过非房室分析进行PopPK模型的构建，通过拟合优度图和可视化预测检验进行评价，运用构建的PopPK模型进行人体PK特征的预测，最后与实际Ⅰ期临床研究结果进行比较验证。结果  构建的PopPK模型预测PK的结果与实际Ⅰ期临床研究结果具有较高的一致性，能较好地预测 GLS-010在1 mg·kg^-1每2周1次（q2w），4 mg·kg^-1（q2w），240 mg （q2w），240 mg 每3周1次（q3w）和10 mg·kg^-1（q2w）给药模式下的人体PK特征，预测的GLS-010最大血药浓度（C_max）分别为24.8，99.1，85.0，85.0和247.8 mg·L^-1，药物浓度-时间曲线下面积AUC_0-336 h分别为4 902.0，20 060.0，17 147.7，22 145.7 （AUC_0-504 h）和50 817.6 mg·h·L^-1。相应给药模式下的安全范围比分别为47.3，11.6，13.5，10.5和4.6。在预测的C_max、平均血药浓度（C_avg）和最小血药浓度（C_min）下稳态受体占有率（RO_ss）分别为38.8%，72.7%，69.4%，64.1%，87.2%；29.1%，63.8%，60.0%，49.8%，82.1%；21.9%，55.5%，51.3%，36.3%，76.7%。结论  该PopPK模型能较好预测不同给药模式下GLS-010的人体PK特征，与实际Ⅰ期临床研究结果一致性较高，可为首次人体研究安全有效剂量的选择提供参考依据。

目的  探究γ-银环蛇毒素（γ-BGT）致小鼠呼吸障碍作用及其可能机制。方法  ① 6只雄性昆明小鼠麻醉后行气管插管术，记录呼吸频率，呼吸稳定后iv给予γ-BGT 6 mg·kg^-1，出现呼吸频率降低后iv给予尼可刹米12.5 mg·kg^-1。采用BL420信号采集与处理系统检测小鼠呼吸频率。② 雄性昆明小鼠随机分为正常对照组 （生理盐水，ip）、γ-BGT 组（6 mg·kg^-1，ip）、γ-BGT+尼可刹米组（ip给予 γ-BGT 6 mg·kg^-1，当小鼠出现呼吸浅慢和腹式呼吸加强时，ip给予尼可刹米12.5 mg·kg^-1）。ELISA法检测延髓组织中谷氨酸（Glu）、γ-氨基丁酸（GABA）含量。Western 印迹法检测延髓组织中谷氨酸脱羧酶65（GAD65）、GAD67蛋白表达水平。③ 体外培养原代小鼠延髓神经元，并分为细胞对照组、γ-BGT 组、氯贝胆碱组、加拉碘铵组、γ-BGT+H-89组、γ-BGT+Y-27632组。γ-BGT 组、氯贝胆碱组、加拉碘铵组分别用γ-BGT40 mg·L^-1、氯贝胆碱100 mmol·L^-1、加拉碘铵 100 mmol·L^-1孵育4 h，γ-BGT+H-89组、γ-BGT+Y-27632组加入γ-BGT 40 mg·L^-1预处理4 h后，分别更换蛋白激酶A（PKA）抑制剂 H-89 50 mmol·L^-1、Ca²⁺通道抑制剂Y-27632 50 mmol·L^-1继续孵育2 h。ELISA检测原代小鼠延髓神经元内Glu、GABA、环磷酸腺苷（cAMP）含量和钙蛋白酶水平。Western印迹法检测原代小鼠延髓神经元内GAD65、GAD67蛋白表达水平及 PKA磷酸化水平。Fluo-4 荧光探针检测原代小鼠延髓神经元内Ca²⁺水平。结果  ① 与正常对照组比较，γ-BGT组小鼠呼吸频率显著降低（P<0.05），γ-BGT+尼可刹米组呼吸频率显著回升（P<0.05）。② 与正常对照组比较，γ-BGT组Glu含量显著降低（P<0.05），GABA含量显著升高（P<0.05），Glu/GABA 比值显著降低；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。与γ-BGT组比较，γ-BGT+尼可刹米组Glu含量显著升高（P<0.05）、GABA含量显著降低（P<0.05），Glu/GABA 比值显著升高；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。③与细胞对照组比较，γ-BGT组Glu含量显著降低（P<0.05），GABA含量显著升高（P<0.05），Glu/GABA 比值显著降低；GAD65和GAD67蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；cAMP含量显著升高（P<0.05），PKA磷酸化水平显著升高（P<0.05），Ca²⁺水平和钙蛋白酶活性显著升高（P<0.05）。与γ-BGT组比较，加拉碘铵组Glu，GABA，Glu/GABA比值和GAD表达水平等方面均呈现相似的变化趋势；γ-BGT+Y-27632组钙蛋白酶活性显著降低（P<0.05），GAD65和GAD67蛋白表达显著降低（P<0.05）；γ-BGT+H-89组Ca²⁺水平和钙蛋白酶活性显著降低（P<0.05）。结论  γ-BGT中毒可导致小鼠呼吸障碍，其机制与γ-BGT通过拮抗延髓神经元M2毒蕈碱乙酰胆碱受体激活cAMP/PKA信号通路，引起细胞内Ca²⁺水平升高，使GAD表达增加和活性增强，导致延髓Glu和GABA含量失衡有关。

近年来，纳米材料在食品、化工和生物医药等领域广泛应用。纳米材料可通过多种途径暴露于人体，其毒性效应值得高度关注。体内研究证实，纳米材料暴露可导致心、肝、肾、皮肤和神经等多个靶器官毒性，其毒性机制与内质网、溶酶体和线粒体等细胞器改变有关。越来越多研究表明，线粒体是纳米材料毒作用的重要靶位。线粒体生物合成作为维持线粒体稳态的重要机制，在纳米材料诱导细胞毒性的过程中发挥重要作用。本文重点综述了纳米材料对线粒体生物合成影响的研究现状，及其通过诱发氧化应激、破坏钙离子稳态、扰动毒性通路等导致线粒体生物合成功能障碍作用机制，为纳米材料的毒性测试和风险评估提供参考。

睡眠障碍日益成为严重危害人类健康、阻碍经济发展的社会和民生问题。褪黑素作为内源性激素，在调控昼夜节律中发挥重要作用。研究表明，外源性褪黑素用于治疗失眠障碍前景良好，值得深入研究和开发。由于药动学性质与药效和毒性密切相关，本文对褪黑素及其主要代谢产物的定量分析方法，特别是生物样品前处理方法以及相关液相色谱-串联质谱定量分析方法，外源性褪黑素在体内外的吸收、分布、代谢、排泄及药物-药物相互作用相关研究，以及内源性褪黑素的水平和种属差异展开系统综述，并初步探讨褪黑素的成药性问题与解决策略，旨在为将外源性褪黑素开发成新型调节睡眠药物提供科学依据。

随着肺纤维化机制研究的深入，抗肺纤维化药物的研发呈多元化趋势。近10年来，多个抗肺纤维化药物的Ⅱ/Ⅲ期临床试验因疗效不佳而终止，其中7种为单一靶点的单克隆抗体药物。而尼达尼布和吡非尼酮作为多靶点药物成功上市，并展现出良好的临床疗效。已有研究表明，直接靶向转化生长因子β的药物存在安全隐患。因此，目前正在Ⅲ期临床试验的并非直接作用于转化生长因子β信号通路的溶血磷脂酸受体1拮抗剂和磷酸二酯酶4B抑制剂有望成功上市。单一靶点药物亦可能存在疗效不足的风险，因此未来药物开发将更倾向于多靶点、多靶细胞策略，并探索协同作用的多药联合治疗方案。本文系统介绍了国内外抗纤维化药物临床试验进展，为新药研发提供参考。