中国药理学与毒理学杂志

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    2024, 38(8): 0.
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  • 论著
    环磷酰胺对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤效应及机制
    李佳佳, 王 娇, 肖文一, 韦冬晖, 张永祥, 蒋 宁, 周文霞
    2024, 38(8): 561. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.001
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    目的  探讨环磷酰胺（CTX）及其活性代谢衍生物4-氢过氧环磷酰胺（4-HC）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤效应及其机制。方法  用CTX〔0（细胞对照），0.01，0.1，1,5，10，20，40和80 mmol·L-1〕和4-HC〔0（细胞对照），0.01，0.1，1,5，10，20，40和80 μmol·L-1）〕处理SH-SY5Y细胞48 h，应用IncuCyte ZOOM系统记录细胞形态变化和生长曲线；CCK-8法检测细胞活力；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测细胞LDH释放率。CTX（0，1，5，10和20 mmol·L-1）和4-HC（0，1，5，10和20 μmol·L-1）处理SH-SY5Y细胞48 h，用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）染色法检测细胞增殖；免疫荧光法检测DNA双链断裂标志物γ-H2AX的含量和线粒体膜电位变化。CTX（0，1，5和10 mmol·L-1）和4-HC（0，1，5和10 μmol·L-1）处理SH-SY5Y细胞48 h，SeaHorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平。结果  与细胞对照组相比，CTX组和4-HC组的细胞融合率曲线逐渐下降；细胞活力显著下降（P<0.01），半数抑制浓度（IC50）分别为4.44 mmol·L-1和4.78 μmol·L-1；LDH释放率显著增加（P<0.01）；EdU+细胞百分比显著降低（P<0.01）；γ-H2AX+细胞百分比显著升高（P<0.05）；线粒体膜电位显著降低（P<0.05）；CTX和4-HC处理导致最大糖酵解能力、酵解储备、最大呼吸速率和ATP产生速率显著降低（P<0.05）。结论  CTX和4-HC对SH-SY5Y细胞具有细胞毒性作用，可降低细胞活力，破坏细胞膜结构，抑制细胞增殖，其机制可能与导致细胞DNA损伤、能量代谢紊乱和线粒体功能障碍密切相关。
  • 论著
    慢性社交挫败应激模型小鼠纹状体脑区空间转录组的变化
    贠文昕, 何 珍, 续繁星, 李 斐, 吴 宁
    2024, 38(8): 575. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.002
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    目的  通过空间转录组技术探索慢性社交挫败应激（CSDS）模型小鼠纹状体转录组的变化，揭示其在抑郁症发生发展中的作用。方法  应用CSDS实验范式建立抑郁样小鼠模型，通过悬尾、强迫游泳、糖水偏爱和社会交互实验分别检测行为绝望、快感缺乏和社交障碍抑郁样指标。选取正常对照小鼠和抑郁样行为明显的CSDS模型小鼠进行纹状体脑区的空间转录组测序，筛选高表达基因，采用DAVID数据库进行KEGG和GO富集分析。结果  CSDS模型小鼠行为绝望、快感缺乏和社交回避行为显著增加（P<0.05，P<0.01）。纹状体空间转录组测序结果显示，正常小鼠筛选得到193个纹状体高表达基因；KEGG和GO分析结果显示，高表达基因与纹状体发育、运动行为和药物成瘾行为调节相关，并与环磷酸腺苷信号通路、环磷酸鸟苷/蛋白激酶G信号通路、钙信号、Ras相关蛋白1和丝裂原活化蛋白激酶信号通路高度相关，同时与γ-氨基丁酸能神经元和多巴胺能神经元突触相关。与正常对照小鼠相比，抑郁样行为明显的CSDS模型小鼠纹状体差异基因298个，高度富集于亨廷顿病、阿尔茨海默病和帕金森病等多种神经退行性疾病相关信号通路。结论  空间转录组技术能够在空间水平揭示正常小鼠和CSDS模型小鼠纹状体脑区的转录组特征，纹状体可能与抑郁导致神经退行性疾病的病理过程相关。
  • 论著
    α1A-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2稳定共表达细胞的构建#br#
    王晓璇, 李玉蕾, 周培岚, 苏瑞斌
    2024, 38(8): 587. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.003
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    目的  建立α1A-肾上腺素能受体（α1A-AR）与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的活化T 细胞核因子2（NFAT2）稳定共表达细胞。方法 ① 将pcDNA3.1-α1A-AR-3×FLAG重组质粒转染至U2OS-EGFP-NFAT2细胞，经潮霉素B（Hygro-B）200 mg·L-1 压力筛选后加入α1A-AR激动剂去甲肾上腺素（NE，10 μmol·L-1）孵育30 min，通过高内涵筛选系统检测细胞核内绿色荧光强度，验证EGFP-NFAT2 核转位，筛选得到稳定表达α1A-AR的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞。② 采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western印迹法检测该细胞和对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中α1A-AR mRNA和蛋白的表达水平。③ 将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞接种于96孔板，分别加入NE（10-8~10-5 mol·L-1）或α2-AR激动剂右美托咪定（DMED，10-8.8 ~10-5 mol·L-1）孵育30 min，通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2 核转位。④ 将U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞分为溶剂对照组、α1-AR拮抗剂萘派地尔（1 μmol·L-1）组、NE（1 μmol·L-1）组、萘派地尔+NE（各1 μmol·L-1共孵育）组、α2-AR拮抗剂阿替美唑（0.1 μmol·L-1）组、DMED（0.1 μmol·L-1）组、阿替美唑+DMED（各0.1 μmol·L-1共孵育）组和萘派地尔+DMED（萘派地尔1 μmol·L-1与 DMED 0.1 μmol·L-1共孵育）组，药物孵育时间均为30 min，通过高内涵筛选系统检测EGFP-NFAT2核转位，验证该细胞α1A-AR功能的特异性。结果  ① Hygro-B压力筛选得到58株U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞，NE 10 μmol·L-1孵育后，其中50号细胞核内绿色荧光强度最强，故选定其为稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞。② Western印迹法结果显示，U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞可明显表达α1A-AR蛋白，而对照细胞U2OS-EGFP-NFAT2中未见α1A-AR蛋白表达。RT-qPCR结果显示，该细胞在传代5~20代内α1A-AR mRNA 均稳定表达，其表达水平为对照细胞的500~800倍。③ NE或DMED使U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞中EGFP-NFAT2核转位明显增加，半数有效浓度（EC50）分别为5.94×10-7和6.15×10-8 mol·L-1。④ 与溶剂对照组和萘派地尔组比较，NE组U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞EGFP-NFAT2核转位明显增强（P<0.01），而萘派地尔+NE组EGFP-NFAT2核转位较NE组明显减弱（P<0.01）。与溶剂对照组和阿替美唑组比较，DMED组EGFP-NFAT2核转位明显增强（P<0.01），阿替美唑+DMED组EGFP-NFAT2核转位与DMED组比较无明显差别，而萘派地尔+DMED组EGFP-NFAT2核转位较DMED组明显减弱（P<0.01）。结论  成功构建稳定共表达α1A-AR和EGFP-NFAT2的U2OS-EGFP-NFAT2-α1A-AR细胞，可用于靶向α1A-AR化合物筛选和受体分子机制研究。
  • 论著
    斑马鱼幼鱼常山碱盐静脉注射给药和水溶液暴露给药毒性比较
    胡晓祯, 马丽娜, 郑长辉, 郭媛媛, 叶祖光, 曹俊岭
    2024, 38(8): 595. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.004
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    目的  对比分析常山碱盐（DAS）iv给药和水溶液暴露给药毒性的区别。方法  ① 将受精后2 d（2 dpf）发育良好的斑马鱼幼鱼随机分为正常对照组（无任何处理）、溶剂对照组（生理盐水，iv）和DAS组（0.125，0.25，0.50，1.00和2.00 mg·kg-1，iv），给药后连续观察3 d，以斑马鱼心率为0确定死亡，计算死亡率、最大非致死剂量（MNLD）和10%致死剂量（LD10）。给药后4 h，体视显微镜观察0.50和2.00 mg·kg-1组斑马鱼静脉窦淤血、心包水肿及心率和血流变慢情况，并计算其发生率。斑马鱼iv给予DAS 0.041，0.136，0.412和0.452 mg·kg-1，给药后连续3 d体视显微镜观察并计算斑马鱼幼鱼发育畸形表型，包括心包水肿、心率异常、血流变慢、循环缺失、眼睛异常、脑部畸形、下颌异常、肝缺失/变性、卵黄囊吸收延迟、肠腔异常、身体着色异常、身体水肿、躯干/尾/脊索弯曲和肌肉变性等发生率。② 斑马鱼幼鱼随机分为正常对照组和DAS水溶液暴露（2.5，5.0，10.0，25.0，50.0，75.0和100.0 mg·L-1）组，连续暴露并观察3 d，计算死亡率、LD10和MNLD。斑马鱼暴露于DAS 0.32，1.06，3.20和11.00 mg·L-1水溶液，连续暴露3 d，体视显微镜观察斑马鱼幼鱼发育畸形表型，并计算其发生率。结果  ① 斑马鱼幼鱼iv给予DAS的MNLD和LD10分别为0.412和0.452 mg·kg-1。与溶剂对照组相比，iv给予DAS 4 h后0.50和2.00 mg·kg-1组斑马鱼静脉窦淤血、心率减慢和心包水肿发生率均显著增加（P<0.05，P<0.01），2.00 mg·kg-1组血流变慢发生率亦显著增加（P<0.01）；DAS 0.041，0.136，0.412和0.452 mg·kg-1组斑马鱼卵黄囊吸收延迟率显著增加（P<0.05，P<0.01），0.452 mg·kg-1组斑马鱼死亡率显著增加（P<0.05），且死亡斑马鱼具有心包水肿现象。② 斑马鱼DAS水溶液暴露的MNLD和LD10分别为3.20和11.00 mg·L-1。与正常对照组相比，3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼心率减慢和血流变慢发生率均明显增加（P<0.01），1.06，3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼肠道明显变黑且发生率显著增加（P<0.01），0.32，1.06，3.20和11.00 mg·L-1组斑马鱼卵黄囊吸收延迟发生率显著增加（P<0.05，P<0.01），11.00 mg·L-1组斑马鱼还出现躯干弯曲和下颌畸形且发生率显著增加（P<0.01）。结论  斑马鱼幼鱼DAS iv给药和水溶液暴露给药的毒性表型不同。DAS水溶液暴露不仅导致幼鱼心率、血流变慢及卵黄囊吸收延迟和肠道变黑现象，同时还可诱导神经发育毒性；但iv给药则可有效避免明显的胃肠道损伤和神经发育毒性。
  • 论著
    2型糖尿病模型大鼠口服司美格鲁肽胶囊的药效学与药动学研究 
    秦红倩, 王夏怡, 张 枢, 李小川, 许 卉, 杨雪超, 孙健民
    2024, 38(8): 604. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.005
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    目的  研究2型糖尿病大鼠ig给予司美格鲁肽（Sem）胶囊的药效学与药动学。方法  将雄性SD大鼠分为正常对照组、2型糖尿病模型组及模型+Sem胶囊0.839，1.678和2.517 mg·kg-1组。采用高糖高脂饮食喂养结合ip给予链脲佐菌素（STZ）诱导2型糖尿病大鼠模型。给予STZ 7 d后，模型+Sem胶囊组空腹ig给予Sem胶囊，每天1次，连续给药14 d。定期检测各组大鼠体重、空腹血糖（FBG）和糖化血红蛋白（HbA1c）水平。连续给药结束后不同时间点采集模型+Sem胶囊0.839，1.678和2.517 mg·kg-1组大鼠血浆，采用液相色谱-串联质谱法测定血浆中Sem的含量，绘制浓度-时间曲线，用WinNonlin非房室模型拟合主要药动学参数。结果 与模型组相比，模型+Sem胶囊各剂量组大鼠体重在Sem胶囊干预7和14 d后均明显下降（P<0.05，P<0.01）；FBG和HbA1c水平在Sem胶囊干预14 d后明显降低（P<0.01）。与正常对照组相比，模型+Sem胶囊1.678和2.517 mg·kg-1组大鼠FBG和HbA1c水平在Sem胶囊干预14 d后无显著差异，提示其FBG和HbA1c水平基本恢复到正常水平。药动学结果表明，大鼠ig 给予Sem胶囊0.839，1.678和2.517 mg·kg-1 14 d后Sem在血浆中的消除半衰期（t1/2）分别为7.40±1.34，7.48±0.33和（8.23±0.90） h；达峰浓度（Cmax）分别为18±9，81±23和（256±53） μg·L-1；达峰时间（Tmax）分别为0.06±0.13，1.56±0.88和（1.50±1.00） h；曲线下面积（AUC0-t）分别为158±76，858±310和（3795±1539） μg·h·L-1； 蓄积指数（RAC）分别为1.12±0.05，1.12±0.01和1.15±0.04。结论  Sem胶囊ig给药可有效降低2型糖尿病模型大鼠体重、FBG和HbA1c水平，具有降糖减重的作用。连续给药14 d后，Sem胶囊在0.839~2.517 mg·kg-1剂量范围内Sem在大鼠体内无蓄积， 暴露量随剂量增加而增大。
    • 综述
  • 综述
    新型冠状病毒感染与宿主糖酵解相互作用研究进展
    李月含, 韩 露, 周文霞
    2024, 38(8): 610. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.006
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    糖酵解与病毒感染性疾病关系密切，且病毒和宿主糖酵解之间的相互作用是多种病毒中存在的共性机制。因此，糖酵解调控可能是重要的抗病毒策略。新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染的流行给人类带来了巨大的灾难，需要从更多不同角度去探寻有效的解决方案。SARS-CoV-2可诱导宿主糖酵解水平升高，而宿主糖酵解水平在 SARS-CoV-2复制和感染中起重要作用，且与病程进展和多种临床症状及并发症相关。对宿主糖酵解与SARS-CoV-2感染相互作用的研究有助于阐明SARS-CoV-2致病机制并促进相关药物研发。本文对SARS-CoV-2感染与宿主糖酵解之间的相互作用进行综述，以期为从代谢调控角度阐明病毒感染与疾病的关系及研究应对措施提供新视角。
  • 综述
    灵芝酸A药理作用及其机制研究新进展
    谢 珍, 业 康, 匡 荣, 陆静娴, 陈碧莲
    2024, 38(8): 619. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.007
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    灵芝被广泛应用于食品（保健）、药品和化妆品等领域。灵芝酸A是一种具有重要药理活性的灵芝三萜类化合物。现代药理研究表明，灵芝酸A具有抗肿瘤、抗神经精神系统疾病、肝保护作用、降血脂作用、抗炎和肾保护作用等多种药理作用。本文对灵芝酸A的药理学作用及其机制研究新进展进行梳理与总结，为其进一步开发和应用提供参考。
  • 综述
    肾类器官血管化研究进展
    刘 鹤, 岳 亮, 吴成君, 檀英霞
    2024, 38(8): 633. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.08.008
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    肾类器官是利用人多能干细胞或组织来源的成体干细胞诱导分化形成主要包含肾小管结构的类器官，由于缺乏血管网络的支持，其组织结构不成熟和生长受限，如何实现肾类器官的血管化是该领域亟待解决的难题。目前，免疫缺陷动物移植、改变诱导分化方案、微流控芯片及调整细胞外基质和氧气浓度等方法可促进肾类器官血管化，为肾类器官科学研究及其临床应用提供了新的研究视角。