论著
黄佳颖, 李劲草, 顾永芳, 刘雨萌, 邱仁洪, 张 扬, 薛 瑞, 李 硕, 董华进, 王艳昕, 张有志
目的 探讨加味天王补心丹（JWBXD）对模拟高原暴露大鼠失眠的改善作用及其机制。方法 ① 将30只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、模型+JWBXD（9.6 mg·kg-1）组、模型+天王补心丹（TWBXD，9.6 mg·kg-1）组和模型+地西泮（DZP，3 mg·kg-1）组。大鼠进行植入子手术，除正常对照组外，其余大鼠置入模拟5000 m海拔高原的低压低氧动物实验舱内，连续7 d。每天9∶00 ig给予相应药物，采用无线生理信号遥测系统进行信号采集和睡眠分析，观察药物对模拟高原暴露模型大鼠睡眠时间和睡眠结构的影响。② 将40只SD大鼠随机分为5组，分组、造模和给药同①，实验过程中每天观察大鼠一般状态并监测体重，造模第7天测试前肢抓力。采用ELISA检测血清促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）和褪黑素（MLT）水平。Western印迹法检测大鼠下丘脑组织中昼夜节律基因节律周期调节蛋白2（Per2）、时钟节律调节蛋白（Clock）、隐花色素节律调节蛋白2（Cry2）、脑-肌肉Arnt样蛋白（Bmal1）、孤核受体REV-ERBα（NR1D1）和糖原合成酶激酶3（GSK-3β）以及松果体组织中褪黑素合成酶乙酰5-羟色胺O-甲基转移酶（ASMT）蛋白表达水平。结果 ① 与正常对照组比较，模型组大鼠睡眠总时间减少（P<0.01），觉醒时间增加（P<0.01），慢波睡眠显著减少（P<0.05），片段平均持续时间缩短（P<0.01）。与模型组比较，DZP，TWBXD和JWBXD均能延长低氧环境中大鼠睡眠时间（P<0.01），有效抑制觉醒（P<0.01）；DZP和JWBXD能够延长慢波睡眠时间（P<0.05，P<0.01），TWBXD无明显作用；JWBXD能够延长模型大鼠慢波睡眠片段平均持续时间（P<0.01），而DZP和TWBXD无此作用。② 与正常对照组比较，模型组大鼠前肢抓力显著下降（P<0.01）；血清ACTH，CRH和CORT水平升高（P<0.05，P<0.01），MLT水平降低（P<0.05）；下丘脑Per2，Cry2，GSK-3β和NR1D1表达水平均降低（P<0.05，P<0.01），Bmal1和Clock表达水平升高（P<0.05，P<0.01）；松果体内ASMT表达水平降低（P<0.05）。与模型组相比较，模型+JWBXD和模型+TWBXD组大鼠前肢抓力增加（P<0.01），模型+DZP组前肢抓力无显著变化；模型+JWBXD组血清CORT和ACTH含量减少（P<0.05），模型+JWBXD、模型+TWBXD和模型+DZP组血清CRH含量降低（P<0.01）而MLT水平升高（P<0.01）；模型+JWBXD组大鼠下丘脑Per2，Cry2，GSK-3β和NR1D1表达水平均升高（P<0.05，P<0.01）而Bmal1和Clock表达水平降低（P<0.05，P<0.01），模型+TWBXD组下丘脑Bmal1表达水平降低（P<0.01）而NR1D1表达水平增加（P<0.05），模型+DZP组下丘脑Per2，Cry2和NR1D1表达均显著增加（P<0.01）；模型+JWBXD组、模型+TWBXD组和模型+DZP组大鼠松果体内ASMT表达水平增加（P<0.05）。结论 JWBXD可改善模拟高原暴露模型大鼠睡眠结构，增加大鼠慢波睡眠持续时间，其机制可能与调节下丘脑核心时钟蛋白表达、促进MLT分泌及抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进相关。
