中国药理学与毒理学杂志

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    2024, 38(12): 0.
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    中文关键词索引（2024 年第38 卷）
    2024, 38(12): 0.
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    • 论著
  • 论著
    miR-125b在心肌肥厚中的作用及机制
    李思韵, 刘蕴琦, 杨 华, 王圣洁, 罗惠珊, 郭建军, 张晴晴, 宣立娜
    2024, 38(12): 887. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.001
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    目的  探究microRNA-125b（miR-125b）对心肌肥厚模型小鼠离子通道相关蛋白表达的作用及机制。方法  ① 动物实验：制备miR-125b过表达及敲减慢病毒小鼠，将雄性C57BL/6小鼠分为LV-miR-125b组（mmu-miR-125b mimic）、LV-miR-125b抑制组（mmu-miR-125b-inhibitor）以及阴性对照组（LV-NC），正常饲养4周；通过透射电镜观察LV-miR-125b小鼠心肌组织切片超微结构的变化。将雄性C57BL/6小鼠分为4组：假手术组（开胸后不进行主动脉弓结扎）、 TAC模型组（主动脉弓缩窄法制备小鼠心肌肥厚模型）、LV-miR-125b抑制+TAC组以及 LV-NC+TAC组，通过超声心动图检测小鼠射血分数（EF）以及短轴缩短率（FS），计算小鼠的心重体重比值（HW/BW）、心重胫骨长度比值（HW/TL）以及心肌肥厚标记物β肌球蛋白重链（β-MHC）表达水平，以评价TAC诱导肥厚模型是否构建成功；Western印迹法检测心脏钠离子通道蛋白（Nav1.5）和心脏钙离子通道蛋白（Cav1.2）的蛋白表达水平；RT-qPCR检测miR-125b以及心肌肥厚标记物心钠肽（ANP）、脑钠肽（BNP）和β-MHC的mRNA水平。② 细胞实验：原代培养昆明乳鼠心肌细胞分为4组：细胞对照组（不做任何处理）、miR-125b过表达组（miR-125b mimic）、miR-125b抑制组（miR-125b mimic+miR-125b inhibitor）以及阴性对照组（NC，转染空质粒）；RT-qPCR检测miR-125b以及ANP，BNP和β-MHC的mRNA水平；Western印迹法和免疫荧光法检测细胞中的Nav1.5和Cav1.2的表达水平；荧光素酶报告基因技术检测miR-125b对靶蛋白Nav1.5和Cav1.2的直接作用。结果  ① 与假手术组相比，TAC模型小鼠的HW/BW和HW/TL显著增加（P<0.05）以及心肌肥厚标记物β-MHC mRNA水平升高（P<0.05），TAC模型制备成功；TAC模型组小鼠miR-125b显著升高（P<0.01）。与LV-NC相比，LV-miR-125b组心肌肥厚标记物ANP，BNP和β-MHC mRNA水平显著升高（P<0.05，P<0.01）；小鼠EF和FS值均降低（P<0.01）；心肌组织超微结构受损。与LV-NC+TAC组相比，LV-miR-125b抑制+TAC组小鼠EF和FS显著升高（P<0.05）；与LV-NC+TAC组相比，LV-miR-125b抑制+TAC组心肌组织中Nav1.5与Cav1.2水平升高（P<0.05）。② 与NC组相比，miR-125b过表达组细胞的miR-125b表达水平显著升高（P<0.01），且ANP，BNP和β-MHC mRNA水平显著升高（P<0.05，P<0.01），而miR-125b抑制后显著逆转了ANP，BNP和β-MHC的升高（P<0.05，P<0.01）。与NC组相比，miR-125b过表达组细胞的Nav1.5和Cav1.2水平显著降低（P<0.01），而miR-125b抑制使Nav1.5和Cav1.2水平升高。荧光素酶报告基因检测结果显示，miR-125b与Nav1.5和Cav1.2离子通道蛋白编码基因SCN5A和CACNA1C直接结合。结论  miR-125b通过抑制Nav1.5和Cav1.2电压门控离子通道蛋白而促进心肌肥厚发生；抑制miR-125b表达改善心肌肥厚。
  • 论著
    丹酚酸A减轻氧糖剥夺/再灌注诱导的BV2细胞炎症反应和氧化应激损伤及可能机制#br#
    管雅琪, 崔 恺, 魏文一, 田雅娟, 张 钊, 楚世峰, 李钦青, 郭继龙, 张 力, 贺文彬
    2024, 38(12): 897. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.002
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    目的  探讨丹酚酸A（Sal A）对氧糖剥夺/再灌注（OGD/R）损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激的影响及可能机制。方法  用含Na2S2O4 10 mmol·L-1的无糖Earle′s平衡盐缓冲液建立BV2细胞的OGD/R损伤模型，加入Na2S2O4无糖Earle′s平衡盐缓冲液，置培养箱（37 ℃，5%CO2）中培养1.5 h（氧糖剥夺）后换为正常培养基培养24 h（再灌注）。随后实验分为细胞对照组、OGD/R组、OGD/R+Sal A 1，5和10 μmol·L-1组、OGD/R+ML385组、OGD/R+ML385+Sal A 1，5和10 μmol·L-1组及OGD/R+依达拉奉（Eda，50 μmol·L-1）组，继续培养24 h。① CCK8法测定细胞存活率。② ELISA检测细胞上清中白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-10、IL-4、转化生长因子β（TGF-β）含量； 化学荧光法检测细胞活性氧（ROS）含量；比色法测定细胞丙二醛（MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和氯霉素乙酰转移酶（CAT）活性。③ Western印迹法检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1（Keap1）、核因子红系2相关因子（Nrf2）、血红素加氧酶1（HO-1）、前醌氧化还原酶1（NQO1）蛋白表达水平及核因子κB p65蛋白磷酸化（p-NF-κB p65）水平。结果  ① 与细胞对照组相比，OGD/R组细胞存活率显著降低（P<0.01）；与OGD/R组相比，OGD/R+Sal A 1，5和10 μmol·L-1组细胞存活率显著升高（P<0.05，P<0.01）。② 与细胞对照组相比，OGD/R组IL-1β，IL-6和TNF-α含量显著升高，IL-10，IL-4和TGF-β含量显著降低，ROS和MDA含量显著升高，SOD，CAT和GSH-Px活性显著降低（P<0.01）；与OGD/R组相比，OGD/R+Sal A 1，5和10 μmol·L-1和OGD/R+Eda组IL-6含量显著降低，IL-10，IL-4和TGF-β含量显著增加，ROS和MDA含量显著降低，SOD，CAT和GSH-Px活性显著升高（P<0.05，P<0.01）。③ 与细胞对照组相比，OGD/R组p-NF-κB p65蛋白表达显著升高（P<0.01）；与OGD/R组相比，OGD/R+Sal A 5和10 μmol·L-1和OGD/R+Eda组
    Keap1和胞浆Nrf2蛋白表达显著降低，胞核Nrf2，HO-1和NQO1蛋白表达显著升高，p-NF-κB p65蛋白表达显著降低（P<0.05，P<0.01）。OGD/R+ML385组与OGD/R组相比，OGD/R+ML385+Sal A 1，5和10 μmol·L-1组分别与OGD/R+Sal A 1，5和10 μmol·L-1组相比，Keap1蛋白表达显著升高，Nrf2胞浆和胞核、HO-1和NQO1蛋白表达显著降低，p-NF-κB p65蛋白表达显著升高P<0.01）。结论  Sal A减轻OGD/R损伤的BV2细胞炎症反应和氧化应激，其作用机制可能是激活Keap1/Nrf2通路和抑制NF-κB通路。
  • 论著
    白桦酯醇抗轮状病毒作用及机制
    杨思雁, 袁 月, 钱余培, 易灏森, 杨芷胭, 徐文韬, 赵文昌, 宋丽军
    2024, 38(12): 907. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.003
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    目的  探讨白桦酯醇（BE）抗轮状病毒（RV）的作用及机制。方法  ①  BE按0.03125~64 μmol·L-1浓度梯度处理MA104细胞72 h，MTT法检测细胞活力。② 设细胞对照组、RV组和RV+BE组，采用细胞病变效应（CPE）法并结合MTT法检测BE抗RV病毒作用（干扰RV吸附、抑制RV生物合成和直接抑制RV）。③ 细胞分组同②，加药培养24 h后，实时荧光定量PCR、Western印迹法和免疫荧光法检测RV结构蛋白VP6的表达水平。④ 细胞分组同②，加药培养24 h后，ELISA 试剂盒检测细胞上清液中促炎因子IL-6，IL-1β和TNF-α及抗炎因子IL-10和Ⅱ型干扰素IFN-γ水平。⑤ 实验分组同②，加药培养24 h后，实时荧光定量PCR检测Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（MYD88）和TNF受体相关因子6（TRAF6）的mRNA表达水平；Western印迹法进一步检测MYD88和IκBα的蛋白表达水平和NF-κB p65的蛋白磷酸化水平。结果  ① 与细胞对照组相比，BE在0.03125~1 μmol· L-1未出现明显细胞毒性，>1 μmol·L-1时细胞活力显著下降（P<0.01）。② 与RV组相比，BE可抑制RV生物合成，0.0625~1 μmol·L-1的BE抗RV-Wa的抑制率>50%，EC50为0.0485 μmol·L-1，治疗指数（TI）为119.48；0.25~1 μmol·L-1的BE抗RV-SA-11的抑制率>50%，EC50为0.1226 μmol·L-1，TI值为47.27。而BE抗RV吸附和直接抑制RV的作用不明显。③ 与RV组相比，RV+BE组RV结构蛋白VP6的蛋白表达水平显著降低(P<0.01）。④ 与RV组相比，RV+BE组IL-6，IL-1β和TNF-α的水平显著降低（P<0.01）；IL-10和IFN-γ水平显著升高（P<0.01）。⑤ 与RV组相比，RV+BE组TLR4，MYD88和TRAF6 的mRNA水平显著降低（P<0.01），MYD88蛋白表达水平显著降低（P<0.01），IκBα蛋白表达水平和NF-κB p65的蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.01）。结论  BE具有抗RV生物合成作用，并可能通过调控TLR4/MYD88/NF-κB信号通路降低了RV引起的炎症反应。
  • 论著
    微量样本蛋白质组前处理流程的建立及衰老小鼠单个窦卵泡蛋白质组图谱的绘制#br#
    张新帅, 李红超, 付 斌, 贺福初, 王晓文, 李 杨
    2024, 38(12): 917. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.004
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    目的  建立一种针对微量样本（1×104细胞）的蛋白质组前处理流程，用于衰老小鼠单个窦卵泡的蛋白质组图谱绘制，并对窦卵泡的衰老图谱进行解析。方法  利用293T细胞，通过对比不同的裂解液、酶切条件、超声处理方式等，建立针对1×104数量级细胞样本（约1 μg数量级蛋白质）的蛋白质组前处理流程。通过与商业化的样本前处理试剂盒（iST试剂盒和Ex极微量试剂盒）进行对比，从蛋白质和肽段鉴定重叠性、蛋白质整体亲/疏水性、蛋白质理论等电点以及蛋白质分子质量4方面对本研究所建立的样本前处理流程进行评估。以100，1 000和10 000 3种数量级小鼠原代脾和肝细胞样本对样本前处理流程的样本适用性进行评估。基于该样本前处理流程，结合timsTOF Pro 2超灵敏质谱仪，绘制青年（2月龄）、中年（12月龄）和老年（22月龄）小鼠的单个窦卵泡的蛋白质组图谱。通过差异表达蛋白质分析与蛋白质表达时间序列分析，寻找与年龄因素显著相关的蛋白质，解析窦卵泡的衰老图谱。结果  本研究建立了一套针对1×104数量级细胞样本的蛋白质组学前处理流程，该流程仅需一步操作完成裂解和还原烷基化，酶切过程无需超声。即对于1×104数量级细胞样本，将裂解液中的脱氧胆酸钠浓度由1%提升至10%，可以使蛋白质平均鉴定种类从4 089种增加到4 389种，具有更佳的裂解效果（P<0.05）；在裂解液中添加碳酸氢铵缓冲液（50 mmol·L-1，90 μL），蛋白质平均鉴定种类从2 579种显著提升至4 389种（P<0.01）；单胰蛋白酶与混合酶（Trypsin/Lys-C）具有相似的酶切效果，均能鉴定到约3 950种蛋白质；将酶切时间由过夜缩短至0.5 h，蛋白质平均鉴定量由4 299种提升至4 632种（P<0.05），在节省时间的同时能获得更高的蛋白质鉴定量。与商业化试剂盒相比，本流程鉴定的蛋白质中约92.3%能被iST试剂盒或Ex极微量试剂盒鉴定，且在亲/疏水性、理论等电点和分子质量等理化性质上无明显偏向，显示出良好稳健性。随着样本中细胞数量增加，鉴定的蛋白质种类显著增加（100、1 000和10 000个细胞样本中，小鼠脾原代细胞分别鉴定到蛋白质525，1 650和3 210种，小鼠肝原代细胞分别鉴定到蛋白质366、1 160和3 590种，P<0.05）。采用该处理流程对青、中、老年小鼠的单个窦卵泡（每组3个窦卵泡）进行了蛋白质组鉴定，每个卵泡均可鉴定超过7 500种蛋白质。基于该数据，本研究通过主成分分析发现，不同年龄阶段的窦卵泡在蛋白质表达状态上表现出明显差异，证实了年龄是影响卵泡生理状态的关键因素。此外，在衰老小鼠的卵泡中，发现与染色体分离相关的蛋白显著下调(P<0.01），提示衰老卵泡中可能存在染色体分离障碍以及减数分裂的失调。通过进一步分析，本研究共识别出739种与年龄显著相关的蛋白质，其中378种正相关，361种负相关。结论  本研究为微量样本提供了一种低成本、易操作、高通量和高灵敏度的蛋白质组样本前处理流程；构建了不同年龄阶段小鼠单个窦卵泡的蛋白质组动态变化图谱，为卵泡衰老基础研究提供了高质量的数据资源，为探索卵巢衰老的潜在治疗靶标和促进生殖力提升的药物开发提供了新的研究思路。
    • 综述
  • 综述
    人参皂苷调节配体门控离子通道研究进展
    钟佳君, 刘 妍, 刘兴阳, 王 珂, 朱军容, 韦忆花, 郑景元, 郑国庆, 文 磊
    2024, 38(12): 932. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.005
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    配体门控离子通道通过与特定配体结合，将化学信号转变为离子电流，进而参与信号传递与细胞间通讯，已成为治疗多种疾病的重要靶点。人参皂苷是人参属药材中的三萜类皂苷，具有广泛的生物学活性。人参皂苷及其代谢产物对烟碱型乙酰胆碱受体、5-羟色胺3型受体、γ-氨基丁酸A型受体、甘氨酸受体、离子型谷氨酸受体和ATP门控P2X通道等配体门控离子通道以及瞬时受体电位通道的功能具有调节作用，从而在抗炎、镇痛、免疫调节、抗癫痫、改善认知功能和神经保护等方面发挥重要作用。进一步研究人参皂苷调节配体门控离子通道的作用及其机制，将为其临床应用和新药研发提供科学依据。
  • 综述
    抗体偶联药物在胶质母细胞瘤治疗中的作用靶点研究进展与挑战
    刘 凯, 董玉超, 刘 玥, 张 航, 苗 嵩, 马程远, 王子豪
    2024, 38(12): 945. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.006
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    胶质母细胞瘤（GBM）是一种原发于颅脑的高度恶性肿瘤，其致死率高且药物治疗效果不佳。抗体药物偶联物（ADC）是近年来抗肿瘤药物研发热点，其结合了抗体特异的靶向性与细胞毒素的强大杀伤力。近年来，多个针对GBM的ADC临床试验结果令人鼓舞。本文综述了GBM治疗相关的ADC靶点（表皮生长因子受体、白细胞分化抗原、甘露糖受体家族、整合素家族和半乳糖凝聚素家族）、ADC药物研究现状及其挑战。
  • 综述
    AGE-RAGE轴在代谢相关疾病发生发展中的作用及其干预策略研究进展
    赵翠梅, 吴亚静, 黎颖然, 龙秀珍, 周 寻, 张文渊
    2024, 38(12): 952. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.007
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    代谢相关疾病是由遗传和环境等多种因素引起的一类慢性疾病，临床特征主要包括胰岛素抵抗、血糖血脂异常和血压升高等，已成为危害人体健康的主要因素，亟需寻找有效的治疗方法。晚期糖基化终末产物（AGE）是一组通过还原糖的羰基与蛋白质、脂质和核酸的游离氨基相互作用形成的复杂且异质的化合物。越来越多的研究表明，AGE与AGE受体（RAGE）参与高血压、糖尿病和动脉粥样硬化等多种代谢相关疾病的发生发展。AGE可通过非受体和受体介导的机制对组织产生不良影响，在受体介导的机制中，AGE与RAGE相互作用增加氧自由基的产生，激活NF-κB，进而增加促炎细胞因子的表达和释放，导致细胞损伤。本文从代谢角度综述AGE和RAGE在高血压、糖尿病和动脉粥样硬化等疾病中的作用机制和干预措施，旨在探讨AGE和RAGE作为代谢相关疾病治疗靶点的潜力，为防治代谢相关疾病提供理论参考。
  • 综述
    甲基苯丙胺滥用诱发神经退行性疾病的机制及相关治疗策略的研究进展
    李 雄, 杨根梦, 严 赫, 丁佳萌, 洪仕君, 张冬先
    2024, 38(12): 959. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2024.12.008
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    甲基苯丙胺（METH）是一种极易上瘾的合成精神活性药物，常作为精神兴奋剂被滥用。METH长期暴露可导致氧化应激、线粒体功能损伤、星形胶质细胞和小胶质细胞的激活及氨基酸兴奋性毒性等，造成神经毒性。METH滥用可增加神经退行性疾病风险，如阿尔茨海默病、帕金森病和亨廷顿病。然而METH诱导神经毒性的机制尚不清楚，且无治疗METH所致神经毒性的方法。本文综述了近年来METH通过诱导神经毒性进而诱发多种神经退行性疾病的相关机制，如神经炎症、谷氨酸兴奋性毒性、氧化应激和线粒体毒性等，并讨论了相关治疗策略。