论著
易 静, 陶 宁, 吕 琳, 刘 超, 张愉宁, 段 晗, 王 华
2022, 36(5): 355-363.
目的 探讨牙髓干细胞来源胞外囊泡(DPSC-EV)对γ射线导致小鼠骨髓细胞凋亡的抑制作用及机制。方法 使用超速离心法从DPSC中分离DPSC-EV,用Western印迹法鉴定其表面标志物,用纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)检测DPSC-EV颗粒数目及粒径大小。细胞处理: ① 60Co γ射线照射小鼠骨髓细胞FDC-P1,单次照射剂量分别为0,2和6 Gy,实验时间为照射后24和48 h;② FDC-P1细胞经60Co γ射线2和6 Gy照射后立即加入DPSC-EV(终浓度5×1011 L-1)干预24 h;③ FDC-P1细胞转染微RNA(miRNA)抑制剂后进行2 Gy照射并立即加入DPSC-EV(终浓度5×1011 L-1)干预24 h;④ FDC-P1细胞转染miRNA模拟物后进行2 Gy照射,继续培养24 h。用流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测胱天蛋白酶3、活化胱天蛋白酶3、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和活化PARP蛋白表达水平,逆转录实时定量PCR检测细胞miR-100-5p表达水平。结果 ① 与细胞对照组相比,60Co γ射线2和6 Gy照射后24和48 h,FDC-P1细胞凋亡率均显著升高(P<0.01),细胞中胱天蛋白酶3和PARP蛋白活化水平均显著升高(P<0.05,P<0.01)。② 照射后加DPSC-EV处理24 h,FDC-P1细胞凋亡率较2和6 Gy单纯照射组均明显降低(P<0.01),PARP蛋白活化水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。③ 经γ射线2 Gy照射后24 h,FDC-P1细胞miR-100-5p表达水平与细胞对照组比较显著降低(P<0.01),DPSC-EV干预可逆转2 Gy照射导致的miR-100-5p表达水平降低(P<0.01);转染miR-100-5p 抑制剂后,FDC-P1细胞经2 Gy照射并加入DPSC-EV后,与抑制剂对照组相比,细胞凋亡率显著升高(P<0.01);④ 转染miR-100-5p模拟物后,2 Gy照射,与模拟物对照组相比,FDC-P1细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论 DPSC-EV可能通过上调骨髓细胞中miR-100-5p表达水平而抑制γ射线所致小鼠骨髓细胞凋亡。