论著
西仁阿依·西热甫， 雷秀英， 张 瑜， 伊力亚斯·艾萨， 木塔力甫·艾买提， 陈 倩， 冯学召， 李 飞， 米 娜
目的 探讨盐酸去氢骆驼蓬碱（HMH）对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及自噬的影响。方法 ① SH-SY5Y细胞分别加入HMH 10，20，40，80和160 μmol·L-1或DMSO（细胞对照组）孵育24 h，通过MTT实验检测SH-SY5Y细胞存活率；Hoechst33342/PI染色法观察细胞凋亡；Western 印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶3、活化的胱天蛋白酶3及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3B-Ⅱ（LC3B-Ⅱ）和P62的表达。② SH-SY5Y细胞分别加入HMH （2和4 μmol·L-1）或DMSO孵育14 d，检测SH-SY5Y细胞克隆形成率。③ HMH 40 μmol·L-1单独或与3-甲基腺嘌呤（3-MA）5 mmol·L-1同时加入SH-SY5Y细胞，分别培养4 或24 h后，Western印迹法检测LC3B-Ⅱ蛋白的表达。④ 将SH-SY5Y细胞分别加入HMH 40 μmol·L-1或溶剂孵育24 h后，Western印迹法检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和p-mTOR的表达。结果 ① 与细胞对照组相比，药物作用24 h后HMH 20~160 μmol·L-1组细胞存活率降低（P<0.01），凋亡细胞增多， LC3B-Ⅱ蛋白的相对表达量及Bax/Bcl-2的比值增加（P<0.05，P<0.01），P62蛋白的相对表达量减少（P<0.01）。HMH 40~160 μmol·L-1组活化的胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3的比值增加（P<0.05）。② 与细胞对照组相比，药物作用14 d后，HMH 2和4 μmol·L-1组细胞克隆形成率降低（P<0.01）。③ HMH与3-MA同时孵育24 h后，细胞LC3B-Ⅱ的相对表达量比HMH 40 μmol·L-1单独处理组降低（P<0.05）。④ 与细胞对照组相比，HMH 40 μmol·L-1组Akt和 mTOR的磷酸化水平均降低（P<0.05）。结论 HMH通过抑制Akt/mTOR通路抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖，诱导凋亡与自噬。
