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• 2007年, 第21卷, 第6期
  刊出日期：2007-12-25

    

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  三氧化二砷体外对哮喘患者外周血T细胞凋亡和白细胞介素4分泌的影响

  覃冬云;黄 韧;吴 铁

  2007, 21(6): 470-475.

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  目的 探讨三氧化二砷治疗哮喘的可能机制。方法 分离21例哮喘患者和20例健康对照者外周血T细胞，分别加入三氧化二砷(0.1 mg·L^-1)或地塞米松(5 mg·L^-1)培养24 h。用ELISA方法检测培养上清液中白细胞介素4(IL-4)的含量，用荧光显微镜、流式细胞术和细胞色素c试剂盒检测细胞凋亡。结果 哮喘患者T细胞自发释放IL-4较健康对照者明显增多；三氧化二砷对健康对照者T细胞IL-4的释放无影响，对哮喘患者T细胞IL-4释放增加具有抑制作用；地塞米松可使两组T细胞IL-4的释放明显降低。哮喘患者外周血T细胞体外培养24 h凋亡百分率较健康对照者明显降低，细胞浆细胞色素c含量降低；三氧化二砷明显增加哮喘患者T细胞凋亡的百分率和细胞色素c的含量，对健康对照者作用不明显；地塞米松可使两组的T细胞凋亡百分率和细胞色素c含量增加。结论 三氧化二砷治疗哮喘的机制可能与诱导哮喘患者T细胞凋亡和IL-4分泌减少有关。
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  掌叶半夏超临界CO₂乙醇萃取物的抗惊厥作用

  陈靖京;杨 蓉;王明正;成银霞;何新嘏;马勇刚;杨李华;何巧燕

  2007, 21(6): 449-454.

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  目的 研究掌叶半夏超临界CO₂乙醇萃取物（SEE-CO₂PP）对青霉素诱发惊厥的对抗作用。方法采用大鼠皮质局部定位注射青霉素诱发惊厥模型，研究SEE-CO₂PP对惊厥发作的潜伏期以及惊厥行为变化的影响，并用RM6240C型多道生理信号采集处理仪记录皮质和海马痫性放电的潜伏期、频率和痫波最高发放波幅，同时应用高效液相色谱法测定海马谷氨酸(Glu)、天冬氨酸 (Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)递质的含量。结果 SEE-CO₂PP 15和30 g·kg^-1(ig)可延长青霉素诱发惊厥的潜伏期，并减弱发作强度。SEE-CO₂PP能够延长痫性放电的潜伏期，减少痫性放电的频率，减小皮质和海马发放痫波的最高波幅，同时，SEE-CO₂PP可以增加海马GABA的水平，对Gly，Asp和Glu水平无明显影响。结论 SEE-CO₂PP可对抗青霉素诱发的惊厥行为和痫样放电，具有抗惊厥作用。
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  超氧化物岐化酶参与p38 MAPK介导的肢体缺血预处理对大鼠全脑缺血的保护作用

  孙晓彩;羡晓辉;蔡劲松;李文斌;张 敏;李清君

  2007, 21(6): 455-461.

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  目的 探讨超氧化物岐化酶（SOD）在p38有丝分裂素激活蛋白激酶(MAPK)介导的肢体缺血预适应(LIP)脑保护中的作用。方法 永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠，重复夹闭双侧股动脉3次（每次10 min，间隔10 min）作为LIP，之后即刻夹闭双侧颈总动脉8 min造成全脑缺血。SB 203580+LIP+脑缺血组于LIP前30 min侧脑室内注射p38 MAPK抑制剂SB 203580 （100 μmol·L^-1, 25 μL）。黄嘌呤氧化酶法测定海马SOD活性，硫代巴比妥酸法测定海马丙二醛（MDA）含量，硫堇染色观察海马的组织学分级。结果 LIP显著抑制脑缺血引起的海马CA1区SOD活性下降、MDA含量增加及延迟性神经元死亡。预先侧脑室注射SB 203580显著阻断LIP对缺血脑组织的上述保护作用。结论 SOD可能作为p38 MAPK的下游分子参与LIP诱导的脑缺血耐受。
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  异莲心碱对百草枯诱导的小鼠急性肺损伤及肺纤维化的保护作用

  汤国想;赵立波;王晓敏;张韶辉;王嘉陵

  2007, 21(6): 462-469.

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  目的 探讨异莲心碱对百草枯（PQ）诱导的小鼠急性肺损伤及肺纤维化是否有保护作用。方法一次性给不同剂量PQ分别制备小鼠急性肺损伤模型（45 mg·kg^-1, ip）和肺纤维化模型（100 mg·kg^-1, ig）。异莲心碱在给PQ前1 d开始给予至实验结束。实验分空白对照组、模型组(PQ)、单用异莲心碱组及异莲心碱治疗组（异莲心碱+PQ）。急性肺损伤模型组给予PQ后第8，24及48 h观察异莲心碱(20 mg·kg^-1, ig, 每天3次)对血浆及支气管肺泡灌洗液（BALF）中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。肺纤维化组给予PQ后14 d观察异莲心碱(10, 20, 40 mg·kg^-1, ig, 每天2次)对肺组织羟脯氨酸含量、肺组织中转化生长因子β₁（TGF-β₁）及基质金属蛋白酶2（MMP-2）表达的影响。同时采用HE染色方法观察两模型在上述各时间点的肺组织病理变化。结果 在急性肺损伤模型中，与空白组比较，模型组的肺组织出现充血、出血、炎性渗出及水肿等病变，血浆和BALF中的SOD活性明显下降，MDA水平明显升高，而血浆中的ALP活性显著升高；与模型组比较，异莲心碱治疗组的肺组织炎症反应减轻，血浆和BALF中SOD活性明显升高，血浆中ALP活性以及血浆和BALF中MDA含量明显降低；单用异莲心碱以上指标无明显作用。在肺纤维化模型中， 一次性给PQ 14 d后，与空白组比较，模型组肺组织出现肺间质增厚和胶原纤维增生等病理变化，肺组织中羟脯氨酸含量明显升高〔（2.44±0.33 ）vs（1.26±0.10 ）mg·g^-1湿组织〕;与模型组比较，异莲心碱10, 20和40 mg·kg^-1治疗组间质炎症及肺纤维化病变有所改善，肺组织中羟脯氨酸含量显著减少〔分别为(2.11±0.21), (1.94±0.24)和(1.89±0.26)mg·g^-1湿组织〕; 与模型组比较, 异莲心碱40 mg·kg^-1治疗组肺组织中TGF-β₁和MMP-2的表达明显降低。结论 异莲心碱对PQ诱导的急性肺损伤及肺纤维化具有一定的保护作用。
  
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  三氧化二砷对狼疮小鼠存活率和自身免疫反应的影响

  夏晓茹;徐 宏;朱小春

  2007, 21(6): 482-486.

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  目的 探讨三氧化二砷（ATO）在治疗系统性红斑狼疮中的应用价值并探讨其作用机制。方法① BXSB狼疮小鼠随机分为ATO治疗组和对照组，每组17只。ATO治疗组隔日ip ATO 0.4 mg·kg^-1至d 105，实验持续至d 210结束，观察两组小鼠的存活率，采用ELISA法检测小鼠血清IgG和抗ds-DNA抗体水平。② 另外20只BXSB狼疮小鼠，同上分组处理，至d 90处死取脾和肾组织，提取总RNA，用RT-PCR方法检测脾和肾组织中干扰素γ（IFN-γ）mRNA的表达。结果 至d 210，ATO治疗组小鼠死亡8只，对照组死亡13只。至d 90和d 105，治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体（A_{450 nm}）分别为0.335±0.011和0.223±0.017，对照组分别为0.688±0.016和0.683±0.014。至d 90 ATO治疗组小鼠脾和肾组织IFN-γ mRNA表达较对照组亦明显下降。至d 105，ATO治疗组血清IgG水平较对照组明显下降，分别为(4.9±1.3)和（6.9±1.0）g·L^-1。结论 ATO可提高BXSB狼疮小鼠的存活率，降低血清IgG和抗ds-DNA抗体水平，抑制脾和肾组织IFN-γ mRNA的表达。
  
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  基于MDCKⅡ细胞的中药成分体外肾毒性评价

  刘 庆;王 旗;杨秀伟;张宝旭

  2007, 21(6): 521-528.

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  目的 用狗肾近端小管上皮(MDCKⅡ)细胞系研究中药成分的肾毒性，探讨其作为评价中药成分肾毒性体内动物实验替代方法的可能性。方法以氯化汞（HgCl₂）为阳性对照，研究已知有肾毒性的马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)和马兜铃酸Ⅱ(AAⅡ), 以及未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚对MDCKⅡ细胞的毒性作用。用MTT法检测细胞存活；倒置显微镜观察细胞形态改变；乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞膜损伤；流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡，用Hoechst 33258染色法观察凋亡细胞形态变化。结果 AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24, 48和72 h细胞存活均被明显抑制，AAⅠ的IC₅₀值分别为(63.4±6.6), (44.8±6.0)和(37.3±4.6)μmol·L^-1，AAⅡ的IC₅₀值分别为（125.7±6.2）,（106.7±20.4）和（94.2±9.7）μmol·L^-1；在5～300 μmol·L^-1时AAⅠ和AAⅡ分别与MDCKⅡ细胞作用24 h，LDH的释放率明显增高；AAⅠ(75 μmol·L^-1) 和AAⅡ(150 μmol·L^-1)分别与MDCKⅡ细胞作用24 h，倒置显微镜下可见细胞收缩变圆，部分细胞破裂脱落；用流式细胞仪和Hoechst 33258染色法观察亦发现，AAⅠ和AAⅡ均可使细胞周期S期阻滞, 诱导MDCKⅡ细胞发生凋亡。苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚在2～10 mmol·L^-1浓度范围内分别与MDCKⅡ细胞作用24 h，对上述指标均无明显影响。结论 MDCKⅡ细胞系对有肾毒性的AAⅠ和AAⅡ和未见肾毒性报道的苦参碱、氧化苦参碱和肉豆蔻醚的反应不同，可用于中药成分体外肾毒性评价。
  
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  水黄皮根乙酸乙酯萃取物对大鼠乙醇型胃黏膜损伤的保护作用

  刘可云;朱 毅;董 志;李 靖;黄 凌;陈国彪

  2007, 21(6): 476-481.

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  目的 研究水黄皮根乙酸乙酯萃取物（PREA）对乙醇致胃黏膜损伤的治疗作用。方法 建立乙醇致大鼠胃黏膜损伤模型，通过观察胃组织病理学改变、计算胃黏膜损伤指数、检测胃黏膜组织一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性评价PREA对乙醇型胃黏膜损伤的保护作用。采用幽门结扎模型，观察PREA对大鼠胃液分泌和胃黏液分泌的影响。结果 与模型组比较，PREA可剂量依赖性地降低乙醇所致胃黏膜损伤指数，明显改善胃黏膜损伤的病理变化，抑制乙醇引起的胃黏膜MDA含量升高及NO水平和SOD活性降低，并显著减少胃酸分泌、抑制游离胃酸酸度和总酸度，对胃蛋白酶活性没有明显影响。另外，可显著抑制幽门结扎模型大鼠胃腔游离黏液以及胃壁结合黏液的分泌。结论 PREA对乙醇型胃黏膜损伤具有明显的保护作用，提示PREA可能成为预防或治疗乙醇所致胃损伤的药物。
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  二苯乙烯苷对C反应蛋白诱导的小鼠巨噬细胞明胶酶A和B表达的影响

  张 伟;李 锋;王玉琴;王春华;沈 燕

  2007, 21(6): 495-500.

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  目的 为探讨二苯乙烯苷(TSG)预防动脉粥样硬化斑块不稳定的可能机制，观察TSG对C反应蛋白（CRP）诱导的巨噬细胞表达明胶酶A和B的影响。方法 体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞，分为空白对照组、模型组（给CRP 20 mg·L^-1）、模型+辛伐他汀100 μg·L^-1组、模型+TSG 120及60 μg·L^-1组。给予CRP 12 h后加入干预药物，共同培养24 h后进行指标的检测。用蛋白免疫印迹法观察各组细胞明胶酶A和B蛋白表达的差异；用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）观察各组细胞明胶酶A和B mRNA表达的差异；ELISA法测定细胞培养液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNFα)含量。结果 蛋白免疫印迹分析显示，模型组明胶酶A和B蛋白的表达较空白对照组明显增加；与模型组（明胶酶A: 1.14±0.26，明胶酶B: 1.26±0.24）相比，辛伐他汀（明胶酶A: 0.71±0.12，明胶酶B: 0.73±0.15）及TSG（120 μg·L^-1组: 明胶酶A, 0.74±0.11，明胶酶B, 0.88±0.13; 60 μg·L^-1组: 明胶酶A, 0.92±0.18，明胶酶B, 1.12±0.18）均能降低明胶酶A和B蛋白的表达，并随TSG处理浓度的增加有下降趋势。RT-PCR显示,模型组明胶酶A和B的mRNA表达较空白对照组明显增加；与模型组（明胶酶A: 2.45±0.18，明胶酶B: 2.59±0.19）相比，辛伐他汀（明胶酶A: 0.86±0.06，明胶酶B: 0.98±0.10）及TSG（120 μg·L^-1组: 明胶酶A, 0.98±0.09，明胶酶B, 1.24±0.13; 60 μg·L^-1组: 明胶酶A, 1.32±0.12，明胶酶B, 1.80±0.15）均能降低明胶酶A和B的mRNA表达，并随TSG处理浓度的增加有下降趋势。ELISA结果显示，与空白对照组比较，模型组IL-6和TNF-α水平明显升高；与模型组〔IL-6（614±52）ng·L^-1，TNFα(82.5±4.7)mg·L^-1〕相比，辛伐他汀〔IL-6(290±32)ng·L^-1，TNFα(36.3±2.7)mg·L^-1〕及TSG〔120 μg·L^-1组: IL-6 （310±28）ng·L^-1，TNFα(42.1±3.1) mg·L^-1; 60 μg·L^-1组: IL-6（498±46）ng·L^-1，TNFα(58.6±3.4) mg·L^-1〕能明显降低细胞培养液中IL-6和TNFα含量。结论 TSG可通过抑制上调的明胶酶A和B的表达、IL-6及TNFα的分泌以抑制斑块不稳定。
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  论著

  抗氧化剂和吲哚生物碱在粉红色和白色长春花植株不同部位中的分布

  Cheruth Abdul JALEEL;Rajaram PANNEERSELVAM

  2007, 21(6): 487-494.

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  目的 研究抗氧化剂和吲哚生物碱在2种长春花（粉红色和白色）植株不同部位的分布。方法通过检测无酶活性的抗氧化分子含量和抗氧化酶活性测定抗氧化能力。无酶活性的抗氧化分子包括抗坏血酸、α-生育酚和还原型谷胱甘肽。抗氧化酶包括超氧化物歧化酶、抗坏血酸过氧化物酶、过氧化氢酶、过氧化物酶和多酚氧化酶。所用样品为从田间收集到的植株的根、茎、叶、花和豆荚。结果与其他部位比较，根和茎中抗氧化剂的含量较高，花和豆荚中含量最低。粉红色长春花中抗氧化剂和生物碱含量较高。叶中抗氧化酶的活性较高，但吲哚生物碱的含量在粉红色长春花的根中较高。结论对于抗氧化剂和生物碱含量而言，粉红色长春花更适合培养。
  
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  论著

  地非三唑对大鼠肝细胞细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导作用

  陈 琳;阮 昊;姚彤炜

  2007, 21(6): 501-504.

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  目的 试从mRNA表达水平阐明地非三唑对鼠肝微粒体中细胞色素P450 CYP1A1/2的诱导机制。方法 给SD大鼠腹腔注射地非三唑，采用Trizol法提取大鼠肝脏RNA,用RT-PCR测定经地非三唑处理1, 2及4 d的鼠肝中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平。结果 地非三唑处理不同时间的鼠肝细胞中细胞色素P450 CYP1A1, CYP1A2 mRNA的表达水平比空白对照组明显增加，空白对照组CYP1A1吸光度比值为0.270±0.040, 诱导1, 2及4 d的吸光度比值分别为0.343±0.055, 0.417±0.045及0.603±0.083；空白对照组的CYP1A2吸光度比值为0.613±0.189, 而诱导1，2及4 d的吸光度比值分别为1.510±0.226, 3.057±0.518及4.120±0.458。随着诱导时间的增加，细胞色素P450 CYP1A1及CYP1A2 mRNA的表达也逐步增加，诱导时间与表达水平之间存在一定的线性关系,相关系数分别为0.9984和0.9563。结论 地非三唑对细胞色素P450 CYP1A1/2 mRNA表达具有诱导作用。
  
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  细胞色素P450 CYP4A的组织和细胞表达特异性

  陆 刚;唐晓波;鲍岩岩;余辉艳;郑 蕾;朱大岭;

  2007, 21(6): 505-511.

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  目的 确定细胞色素P450 CYP4A在组织和细胞水平表达是否具有特异性。方法 采用Western印迹法分析细胞色素P450 CYP4A蛋白在培养的牛肺动脉内皮细胞、平滑肌细胞及牛肾动脉内皮细胞的表达；采用原位杂交法检测细胞色素P450 CYP4A mRNA在大鼠肺支气管内皮和血管内皮细胞的表达；以¹⁴C标记的花生四烯酸（AA）作为反应底物，用荧光高效液相色谱法（HPLC）通过检测牛肺动脉内皮细胞催化外源性AA生成20-羟基廿碳四烯酸（20-HETE）的反应，确定肺动脉内皮细胞是否存在细胞色素P450 CYP4A；将肺动脉内皮细胞破碎并用乙酸乙酯萃取，用荧光物质标记萃取物，用荧光HPLC检测内源性20-HETE，从代谢产物水平确定细胞色素P450 CYP4A的功能蛋白质表达。结果① Western印迹法分析结果表明，细胞色素P450 CYP4A蛋白在牛肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞中均有表达，在肺动脉内皮细胞中的表达明显高于平滑肌细胞(积分吸光度值分别为10 182±279，5249±167）；在牛肾动脉内皮细胞中也有表达，但明显低于肺动脉内皮细胞的表达(积分吸光度值分别为12 173±171，17 863±207）。② 原位杂交结果显示，细胞色素P450 CYP4A mRNA可在大鼠肺支气管内皮细胞和大鼠肺血管内皮均有表达。③ 用HPLC在牛肺动脉内皮细胞中检测到20-HETE，表明细胞色素P450 CYP4A在肺动脉内皮细胞存在。 结论 细胞色素P450 CYP4A有其特定的组织和细胞分布,在牛和大鼠肺脏动脉内皮细胞有高表达。
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  论著

  氯化两面针碱体外对人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的抗癌活性

  王博龙;刘华钢;杨 斌;秦三海

  2007, 21(6): 512-515.

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  目的 探讨氯化两面针碱对多药耐药癌细胞的抗癌作用。方法 应用MTT比色法测定细胞存活率，流式细胞术测定细胞周期，Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡，酶联免疫吸附法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）含量。结果 氯化两面针碱（0.75，1.5，3，6和12 mg·L^-1）浓度依赖性地降低人口腔鳞癌多药耐药细胞KBV200的存活率，作用48 h时IC₅₀值为（2.43±0.19）mg·L^-1；氯化两面针碱（0，3，6和9 mg·L^-1）与KBV200细胞作用48 h，细胞凋亡率依次为（1.6±0.4）％，（2.3±0.7）％，（14.0±2.5）％和（8.3±2.2）％；氯化两面针碱6 mg·L^-1可使KBV200细胞caspase 3含量升高，3 mg·L^-1作用12，24和48 h可增加KBV200细胞G₂/M期细胞比例。结论 氯化两面针碱对多药耐药KBV200细胞具有抑制生长、促进凋亡和阻滞细胞周期的作用，可能是对多药耐药癌细胞敏感的一种中药活性成分。
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  论著

  麻痹性贝类毒素在大鼠体内的分布与累积

  刘洁生;杨 莉;杨维东;吴敏仪

  2007, 21(6): 516-520.

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  目的 检测低剂量摄入麻痹性贝类毒素(PSP)后，多种毒素在大鼠内脏器官中的分布和累积情况，为进一步完善贝类水产品中麻痹性贝毒的安全标准提供依据。方法 按美国公职分析化学家协会（AOAC）推荐的麻痹性贝毒小鼠测定法从自然毒化的海湾扇贝和华贵栉孔扇贝中提取PSP粗毒素，分别给大鼠灌胃51.2, 25.6和10.2小鼠单位·kg^-1，每天1次，连续28 d。同时设溶剂（未毒化贝组织的盐酸提取液）对照组和空白对照组。停毒后的d 1, d 3和d 14心脏取血，处死大鼠，收集肝、肾、脾和脑等组织，采用高效液相色谱法检测各组织中PSP的种类和含量。结果 在所检测的4个内脏组织中，3个剂量的肝和肾脏组织中均检测出PSP，并且在停毒d 14时仍有毒素存留，在脑和脾脏组织未检测出PSP。肝和肾组织中累积的PSP种类不同，所检测的各类PSP中，膝沟藻毒素4最易在大鼠肝和肾脏中累积。结论 低剂量经口染毒的PSP可分布于大鼠的肝和肾脏，且在肝和肾脏中累积。