论著
李 琳, 张 营, 赵晟珣, 肖方喜, 张林英, 刘 菊
目的 探讨天麻素（GSTD）对高脂和高胆固醇（HFHC）饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的治疗作用及可能机制。方法 6周龄雄性C57BL/6小鼠按体重分为6组，每组8只：正常对照组、模型组、模型+GSTD 12.5，25.0和50.0 mg·kg-1组及模型+二甲双胍（Met） 100 mg·kg-1阳性对照组。除正常对照组外，其余各组小鼠饲喂HFHC饮食24周建立NASH模型；第17周开始，治疗组同时ig给予相应分组药物，每天1次，连续8周。第24周末，测量小鼠肝湿重、体重和肝指数。HE染色观察肝组织形态，计算非酒精性脂肪性肝病活动积分（NAS），Masson染色观察肝组织胶原纤维增生，油红O染色观察肝组织脂质沉积，血糖仪测全血血糖，ELISA法检测血清胰岛素水平计算胰岛素抵抗指数；化学显色法检测血清谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）活性，肝组织中甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、游离脂肪酸（NEFA）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平，超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性；实时定量PCR（RT-qPCR）检测肝组织脂质合成基因〔脂肪酸合成酶（FASN）、血小板反应蛋白受体（CD36）、硬脂酰辅酶 A 去饱和酶 1（SCD1）、过氧化物酶增殖物活化受体γ（PPARγ）〕脂质氧化基因PPARα、肉毒碱棕榈酰基转移酶1α（CPT1-α）、炎症因子基因〔肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）、IL-1β、趋化因子配体2（CCL2）和CCL5〕和纤维化标志物基因〔Ⅰ型胶原α1（ColⅠα1）、肌动蛋白α2（Actα2）、结缔组织生长因子（CTGF）和转化生长因子β1（TGF-β1）〕mRNA水平；Western印迹法检测肝组织胰岛素受体底物1（IRS-1）、蛋白激酶B（Akt）和NF-κB蛋白磷酸化水平。结果 与正常对照组相比，模型组肝湿重和体重增加（P<0.01），肝指数升高（P<0.05）；肝组织出现严重的大泡性脂肪变性，并伴有大量炎症细胞浸润和胶原纤维增生，NAS评分升高（P<0.01）；血糖和血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数以及血清GPT和GOT活性升高（P<0.01）；肝组织TG、TC、NEFA和MDA水平升高（P<0.01），GSH水平、SOD和CAT活性降低（P<0.01）；脂质合成基因mRNA水平升高（P<0.01），脂质氧化基因mRNA水平降低（P<0.01）；炎症因子和纤维化基因mRNA水平升高（P<0.01）；肝组织IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平降低（P<0.01），NF-κB蛋白磷酸化水平升高（P<0.01）。与模型组相比，模型+GSTD 50.0 mg·kg-1组肝湿重、体重和肝指数降低（P<0.05，P<0.01）。模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1及模型+Met 100 mg·kg-1组肝组织大泡性脂肪变性减少，NAS评分显著降低（P<0.05，P<0.01），炎症细胞浸润和胶原纤维增生减少，同时，血糖和血清胰岛素水平、胰岛素抵抗指数以及血清GPT和GOT活性降低（P<0.05，P<0.01）；此外，模型+GSTD 50.0 mg·kg-1组肝组织中TG、TC、NEFA和MDA水平降低（P<0.01），GSH水平、SOD和CAT活性升高（P<0.01），脂质合成基因mRNA水平降低（P<0.01），脂质氧化基因mRNA水平增加（P<0.01）；模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1组肝组织中炎症因子和纤维化基因mRNA水平均显著下降（P<0.05，P<0.01）；模型+GSTD 25.0和50.0 mg·kg-1及模型+Met 100 mg·kg-1组肝组织IRS-1和Akt蛋白磷酸化水平升高（P<0.01），NF-κB蛋白磷酸化水平降低（P<0.01）。结论 GSTD对HFHC饮食诱导的小鼠NASH具有显著的治疗作用，其作用机制可能与激活肝内IRS-1/Akt信号通路，缓解氧化应激和抑制NF-κB信号介导的炎症反应有关。
