中国药理学与毒理学杂志

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    2019, 33(3): 0-0.
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    快速起效抗抑郁药研发策略：单胺（5-HT）-非单胺（Glu/GABA）长反馈神经环路候选假说的提出
    李云峰
    2019, 33(3): 161-173. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.001
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    抑郁症已成为全球性严重的公共卫生问题，目前临床一线抗抑郁剂大多是基于经典的“单胺假说（策略）”研发的，这些药物普遍存在起效缓慢、有效率不高、损伤认知和致自杀倾向等缺陷，因此，突破经典单胺策略框架，发展快速起效、兼可增强认知和低毒副作用抗抑郁药物是目前全球性重大需求和方向。2019年，S-氯胺酮和别孕烯醇酮（brexanolone）等快速起效抗抑郁药的上市为基于N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）和γ-氨基丁酸A（GABAA）等受体的非单胺策略开辟了全新的前景。目前快速起效抗抑郁药研发总体趋势主要有二：即基于优化多靶标的单胺策略（现代单胺策略）和基于谷氨酸（Glu）-GABA平衡调控的非单胺策略。根据本实验室和国外同行的研究，我们提出单胺-非单胺即“5-羟色胺（5-HT）-Glu/GABA长反馈神经环路”候选假说，认为脑内单胺调控机制（如5-HT神经元，位于中缝核）与非单胺调节机制（Glu/GABA神经元，位于前额皮质等脑区）均是快速起效抗抑郁药机制的一部分，二者共同组成长反馈神经环路，介导前额皮质和海马等效应脑区快速增强的突触可塑性。基于该环路提出5个方面抗抑郁快速起效的候选策略：① 通过解除GABA中间神经元对Glu锥体神经元的抑制或直接激活Glu锥体神经元，实现快速兴奋/抑制（E/I）平衡；② 借助5-HT1A等受体同时调控5-HT神经元活性和兴奋/抑制平衡（同时增强单胺-非单胺环节）；③ 直接激活哺乳动物西罗莫司（雷帕霉素）靶蛋白复合物1（mTORC1），快速增强脑源性神经营养因子（BDNF）-mTOR通路；④ 刺激脑内BDNF的快速释放。⑤ 正向变构调节GABAA受体。希望这些思路和策略为进一步发现快速抗抑郁候选靶标提供有益的借鉴。
    • 论著
  • 论著
    Comparative study of cytochrome P450 expression in three permanent human hepatocytes
    GE Yun-xuan, MA Zeng-chun, YANG Ying, WANG Jia, WANG Yu-guang, GAO Yue
    2019, 33(3): 174-183. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.002
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    目的  比较3种人源肝永生化细胞LX-2，L02和HepG2药物代谢酶的表达差异，确定适合于特定细胞色素P450（CYP）亚型研究的细胞类型。方法  体外培养人源传代肝细胞L02，LX-2和HepG2，以奥美拉唑（Ome）、地塞米松（Dex）、苯巴比妥钠（Phe）、异烟肼（Iso）和利福平（Rif）0，5，10，20和40 μmol•L-1进行诱导。CCK-8法检测细胞存活，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测LX-2细胞中CYP1A2，CYP2B6，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1 和 CYP3A4 基因表达水平；Western印迹法检测LX-2，L02 和HepG2细胞中以上7种CYP亚型蛋白表达水平；LX-2，L02和HepG2经Rif 5，10，20和40 μmol•L-1诱导后，Luciferin-PFBE法检测细胞中CYP3A4酶活性变化。结果  CCK-8结果显示，与相应细胞对照组相比，Ome，Dex，Phe，Iso和Rif （≤ 40 μmol•L-1）作用于LX-2，L02和HepG2细胞24 h，细胞存活率均>80%；RT-qPCR法检测结果显示，与LX-2细胞对照组相比，Phe诱导CYP2B6（P<0.05）和CYP2D6（P<0.01）表达上升；Western蛋白印迹结果显示，L02，LX-2和HepG2细胞经Ome，Dex，Phe，Iso和Rif 40 μmol•L-1处理后，CYP1A2，CYP2B6，CYP2C9，CYP2C19，CYP2D6，CYP2E1和CYP3A4蛋白表达存在差异。L02细胞中 CYP2C9（IA=1.58±0.07），CYP2C19（IA=0.96±0.02）和 CYP3A4（IA=1.30±0.01），LX-2 细胞中CYP2B6（IA=1.48±0.01）和 CYP2D6（IA=1.46±0.02），HepG2 细胞中的CYP1A2（IA=1.62±0.19）和CYP2E1（IA=1.49±0.10）分别具有最高的表达丰度。CYP3A4 酶活性检测显示，Rif 处理 L02，LX-2 和HepG2细胞24 h后，CYP3A4活性变化无统计学差异。结论  L02，LX-2和HepG2细胞中CYP亚型蛋白表达丰度差异提示，L02 细胞适用于 CYP2C9，CYP2C19 和 CYP3A4 实验；LX-2 细胞适用于 CYP2B6 和CYP2D6实验；HepG2细胞适用于CYP1A2和CYP2E1实验。
  • 论著
    丙戊酸诱导的SD大鼠和C57小鼠孤独症谱系障碍模型的比较
    胡宇玲，郑文霞，侯倩伶，汪小青，陈思思，徐梦洲，茹思兰江?安外尔，陈 笛
    2019, 33(3): 184-192. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.003
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    目的  比较丙戊酸（VPA）诱导的C57小鼠和SD大鼠孤独症谱系障碍（ASD）模型在生理发育、神经发育和孤独症样行为等方面的异同，为合理选择ASD动物模型提供实验依据。方法  孕12.5 d的C57小鼠和SD大鼠，分别ip给予VPA 600 mg•kg-1或无菌生理盐水（正常对照组）。观察各组孕鼠出产率；新生仔鼠的外观畸形率；雄性仔鼠的4日存活率、体质量、尾长和尾部外观畸形率，以及腹毛生长、门齿萌出和睁眼时间等生理发育指标；雄性仔鼠的平面翻正反射、空中翻正反射、转体、断崖回避反射、直线爬行、抓杆和听觉惊愕反射行为达到阳性的天数等神经发育指标；并通过旷场实验、三箱社交实验和自我捋毛实验检测各组雄性仔鼠的孤独症样行为。 结果  与各自正常对照组相比，C57小鼠VPA组孕鼠出产率明显降低（P<0.05），新生仔鼠外观畸形率显著升高（P<0.01），而SD大鼠VPA组孕鼠出产率和新生仔鼠外观畸形率均无差异。C57小鼠VPA组雄性仔鼠较其正常对照组的4 d存活率降低（P<0.05）、在出生后20和25 d时体质量较轻（P<0.05）、门齿萌出和睁眼时间延迟（P<0.05，P<0.01）；SD大鼠VPA组雄性仔鼠在相同日龄时体质量虽也明显低于其正常对照组（P<0.01），但4 d存活率、腹毛生长、门齿萌出时间和睁眼时间无差异。C57小鼠VPA组雄性仔鼠的转体和抓杆实验达阳性天数明显滞后（P<0.05），但在平面翻正、断崖回避、空中翻正、直线爬行和抓杆实验中无明显差异；SD大鼠VPA组雄性仔鼠的平面翻正（P<0.01）、断崖回避（P<0.01）、空中翻正（P<0.05）、直线爬行（P<0.01）和抓杆实验（P<0.01）达阳性天数均有显著延迟，但在转体实验中无明显差异。在三箱社交实验、旷场实验和自我捋毛实验中，C57小鼠VPA组雄性仔鼠空间探索力和对新鲜事物偏好降低（P<0.05）；SD大鼠VPA组雄性仔鼠不仅出现明显的空间探索力下降（P<0.01），还伴有明显的社交缺陷（P<0.01）、缺乏社交偏好和新鲜事物偏好（P<0.01）和重复刻板行为（P<0.05）。结论  孕中期注射VPA的C57小鼠和SD大鼠，其子代雄性仔鼠均可出现典型的孤独症谱系障碍核心症状，但在母鼠孕产情况、建模成本和模型表观效度等方面，SD大鼠较C57小鼠更适于制备ASD动物模型。
  • 论著
    奥拉帕尼通过PARP-1通路调控脂多糖诱导的A549细胞炎症反应
    罗超,吴伟斌,周瑾，魏熵熵，厉美洋
    2019, 33(3): 193-199. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.004
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    目的  探讨奥拉帕尼对脂多糖（LPS）诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤的保护作用。方法  体外培养的肺泡上皮细胞（A549）同时加入LPS 10mg•L-1+奥拉帕尼10和25 μmol•L-1孵育24 h。酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素6（IL-6），IL-8和IL-10释放；实时PCR技术检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-1β、IL-6、IL-8和细胞间黏附分子1（ICAM-1）mRNA 的表达水平；流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）水平；Western印迹法检测细胞聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP-1）蛋白表达水平和NF-κB通路相关蛋白磷酸化水平。结果  与LPS 10 mg•L-1损伤组相比，奥拉帕尼10和25 μmol•L-1显著降低LPS诱导的A549细胞IL-6，IL-8的释放（P<0.01）和ROS水平（P<0.01），升高IL-10水平（P<0.01），抑制了LPS诱导的TNF-α，IL-1β，IL-6，IL-8和ICAM-1 mRNA表达水平（P<0.01），抑制LPS诱导的PARP-1蛋白表达和NF-κB通路磷酸化激活（P<0.01）。结论  奥拉帕尼可有效缓解LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症损伤和氧化应激，其作用机制可能为奥拉帕尼通过下调PARP-1的表达，继而影响NF-κB通路的活化，最终抑制了相关炎症因子的表达和释放。
  • 论著
    氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制
    蒲倩，吴成林，陈秀秀，王欲晓，周丽君
    2019, 33(3): 200-207. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.005
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    目的  观察氯喹对三阴乳腺癌MDA - MB - 231细胞增殖的影响，并探讨其机制。方法  用氯喹20，40和80 μmol•L-1分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h，采用CCK - 8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和凋亡，Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2（CDK2）和CDK4，细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP）及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B（LC3B）和自噬底物SQSTM1表达水平。结果  氯喹20，40和80 μmol•L-1与MDA - MB-231细胞作用24和48 h后，均能有效抑制细胞增殖（P<0.01）。与细胞对照组相比，氯喹20和40 μmol•L-1处理24 h，G0/G1期细胞百分比显著增高（P<0.01）；80 μmol•L-1组G2/M期细胞百分比升高（P<0.01），且细胞凋亡率增加（P<0.01）。处理48 h，与细胞对照组相比，氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高（P<0.05）。氯喹3组处理24 h，与细胞对照组相比，细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低（P<0.01），活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强（P<0.01），LC3B和SQSTM1表达水平显著升高（P<0.01）。结论  氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。
  • 论著
    淫羊藿总黄酮改善自然衰老大鼠睾丸支持细胞分泌功能衰退的作用
    陈茜，张长城，韩贵芳，马娜，袁丁，赵海霞
    2019, 33(3): 208-215. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.006
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    目的  研究淫羊藿总黄酮（TFE）对衰老睾丸支持细胞（Sertoli细胞）分泌功能衰退的影响，并从肌醇需酶1α（IRE1α）/ X盒结合蛋白1（XBP1）信号通路探讨其分子机制。方法  将36只SPF级18月龄SD雄性大鼠随机分为自然衰老组和TFE 10及40 mg•kg-1组，每组12只；另取10只2月龄大鼠作为壮龄对照组。每天定时ig 给TFE 1次，每5 d间隔2 d再继续ig给药，给药共计4个月。计算睾丸指数；HE染色观察睾丸组织形态；实时定量PCR和Western 印迹法检测睾丸组织中胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、骨形态形成蛋白 4（BMP4）及干细胞因子（SCF）mRNA 和蛋白表达水平；检测睾丸组织中磷酸化 IRE1α（p-IRE1α）和XBP1蛋白表达水平；免疫荧光法检测睾丸组织内Sertoli细胞数量和p-IRE1α定位。结果  与壮龄对照组比较，自然衰老组大鼠睾丸指数显著降低（P<0.01）；与自然衰老组相比，TFE 40 mg•kg-1组睾丸指数显著升高（P<0.05）。HE结果显示，自然衰老组睾丸曲细精管的形态结构紊乱，部分生精细胞发生脱落；TFE给药组能改善睾丸曲细精管的形态结构。实时定量PCR结果显示，与壮龄对照组比较，自然衰老组Sertoli细胞分泌因子GDNF和SCF mRNA表达水平均显著下调（P<0.01）；Western印迹结果显示，GDNF，BMP4和SCF蛋白显著下调（P<0.01）。与自然衰老组相比，TFE给药组分泌因子mRNA和蛋白表达水平均显著上调（P<0.05，P<0.01）。Western印迹结果显示，与壮龄对照组比较，自然衰老组睾丸组织中p-IRE1α和XBP1蛋白表达均显著下调（P<0.01）；与自然衰老组相比，TFE给药组p-IRE1α和XBP1蛋白表达显著上调（P<0.01）。免疫荧光结果显示，壮龄对照组、自然衰老组和TFE给药组Sertoli细胞数量无显著差异。不仅在生精细胞胞质广泛表达，在Sertoli细胞胞质亦有表达。结论  TFE可显著改善自然衰老所致大鼠睾丸Sertoli细胞分泌功能衰退，其机制可能与调节IRE1α/XBP1信号通路有关。
  • 论著
    基于肼化学富集法分析人血浆外泌体中的N-糖基化蛋白质
    白海红，王兴河，车津晶
    2019, 33(3): 216-223. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.007
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    目的  对人血浆外泌体中N-糖基化蛋白质的组成和功能进行分析。方法  通过超速离心法分离获得健康人血浆外泌体，超声处理获得外泌体蛋白，胰蛋白酶将蛋白酶解为肽段。肼化学法分离富集血浆外泌体中的N-糖基化肽段，液相色谱及高分辨质谱对其进行鉴定，基因本体法对鉴定的N-糖基化蛋白质的生物学功能进行分析。结果  获得的外泌体具有外泌体典型的茶托样双层膜结构，形态完整，大小均匀，直径分布在100 nm左右。在1 mL健康人血浆外泌体中共鉴定到252个N-糖基化修饰位点，归属于131个N-糖基化蛋白质。可能在 丝氨酸型内肽酶活性、丝氨酸型内肽酶活性抑制及钙离子结合 等生命过程中发挥重要作用。其中，67个N-糖基化蛋白质与疾病的发生发展密切相关。结论  本研究在人血浆外泌体中共鉴定到131个N-糖基化蛋白质。它们可能参与关键的生命活动及疾病的发生发展。
    • 综述
  • 综述
    单味中药及复方对实验性糖尿病视网膜病变防治作用的研究进展
    宋旺，袁媛，葛争艳，金龙，许扬
    2019, 33(3): 224-231. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.008
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    糖尿病视网膜病变（DR）是一种常见的糖尿病微血管并发症，是成年人致盲的主要原因。近年来的研究表明，单味中药如葛根、姜黄、枸杞、银杏叶和丹参等，中药复方如活血解毒方、菩人丹超微粉、通脉糖眼明胶囊、芪黄明目胶囊和复方血栓通等在防治DR变中有一定作用，其作用机制与保护视网膜毛细血管周细胞、内皮细胞的功能，减少相关分子如晚期糖基化终末产物形成及其受体的表达，抑制NF-κB的活化，抑制血管内皮细胞生长因子的表达，缓解线粒体氧化应激，抑制凋亡基因及蛋白表达，保护视网膜神经细胞等有关。本文就近年来单味中药及复方对实验性DR的研究进展进行归纳，以期对中药防治DR病变及创新药物研究提供参考。
  • 综述
    肉毒神经毒素小分子抑制剂的研究进展
    田自有，陈赛贞，周金明，梁斌
    2019, 33(3): 232-240. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2019.03.009
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    肉毒神经毒素（BoNT）是目前已知毒性最大的生物毒素，分为血清型A~G，具有高专一性地使表面神经末梢迟缓性麻痹的特点。由于BoNT具有简单易得和特殊的作用机制，近年来被广泛应用于美容和临床治疗及研究，存在由于过量使用引起中毒的风险。同时，由于其高毒性，BoNT也是潜在的恐怖分子比较青睐的生化武器。因此，对于BoNT抑制剂的研究刻不容缓。本文综述了BoNT的结构及其引起中毒的分子机制，重点综述了近年来靶向A型BoNT轻链锌活性位点的8-羟基喹啉类、异羟肟羧酸类小分子抑制剂、A型BoNT轻链共价结合的不可逆小分子抑制剂、靶向A型BoNT轻链外结合位点的小分子非竞争抑制剂，以及靶向B、E型BoNT轻链的小分子抑制剂等方面的研究进展。