中国药理学与毒理学杂志

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    2018, 32(10): 0-0.
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    • 中药毒理学前沿--肾毒性
  • 中药毒理学前沿--肾毒性
    中药肾毒性正确认识及合理应用之思考
    卢芳，张宁，刘树民
    2018, 32(10): 747-753. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.001
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    通过查阅国内外中药肾毒性文献，并结合自身科研及临床经验，对中药肾毒性的正确认识、中药致肾损伤的病理特点和临床表现、产生原因及合理应用进行详细阐述，提出中药毒性的有无、大小与机体的状态即病和（或）证有关，强调不能孤立地看待药物本身有无毒性，要着眼于药物与机体、重视药物与证候之间的关系来辨证论治，即“有是故，用是药”。同时，对中药肾毒性的研究方向和思路进行初步分析，强调在中药复方中整体判断中药肾毒性和在病理状态下研究中药肾毒性，且结合临床实践提出一些针对中药肾损伤的预防措施，以期达到中药安全合理应用的目的，避免严重不良反应事件的发生，并为中药肾毒性的相关
    研究提供参考信息。
  • 中药毒理学前沿--肾毒性
    药物非临床安全性评价中肾毒性指标的分析
    宁娜，朱飞鹏，王和枚，贺学林，韩玲
    2018, 32(10): 754-756. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.002
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    预测新药肾毒性的过程是一个客观、严谨的分析与评价过程，数据链的完整是其必要条件。反映肾毒性的主要检查项目包括尿检、血液生化检查、大体解剖、脏器质量以及组织病理学检查等，如何准确、客观地评价异常指标是药物非临床研究及后续临床试验中需要重点考虑的问题。本文综述了非临床肾毒性指标及其评价思路，为用药风险点的确定和临床试验方案的设计提供参考。
    • 论著
  • 论著
    Establishment and application of detection method for staphylococcal entertoxin A
    李倩，武军华，高珊，贾培媛，魏文青，王玉霞
    2018, 32(10): 757-763. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.003
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    目的  建立一种敏感、特异、便捷的方法，用于检测食源性金黄色葡萄球菌肠毒素A（SEA）。方法  采用经典的细胞融合技术制备抗SEA 的单克隆抗体，亲和层析纯化抗体蛋白，ELISA 方法测定抗体滴度，免疫层析分析抗体亚型。以抗SEA 单抗为一抗，建立Western 印迹法，检测不同食物样品中的SEA。结果  筛选出3 株抗SEA 的单抗，命名为SEA-7，SEA-18 和SEA-86。纯化后的3 株单抗纯度均>90%，抗体滴度均在1∶32 000，经鉴定均为IgG1亚型。利用3 株单抗建立检测SEA 的Western 印迹法，SEA-7 的检测灵敏度最高，可达1.56 ng。以SEA-7 为一抗，可检测出不同食物中污染的SEA，如污染了1.56 ng SEA 的水，污染了5 ng SEA 的粥或火腿肠匀浆。结论  建立的检测SEA 方法可靠灵敏，可用于监测食源性金黄色葡萄球菌污染。
  • 论著
    苯扎贝特改善实验性糖尿病小鼠心肌肥厚作用及可能机制
    张杰，丁淑梅，邱红梅，黄波，吴芹，蒋青松
    2018, 32(10): 764-771. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.004
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    目的  观察苯扎贝特（BEZ）对糖尿病小鼠心肌肥厚的治疗作用及其对环氧廿碳三烯酸（EET）的影响。方法  小鼠高糖高脂饮食喂养4 周后，连续5 d ip 给予STZ 40 mg•kg-1，7 d 后测量小鼠空腹血糖（FBG）值。随机选取FBG ≥11.1 mmol•L-1的小鼠，继续给予高糖高脂饮食4 周后，分为模型组、BEZ 25 mg•kg-1（约为临床常用剂量1/3）组和BEZ 75 mg•kg-1（与临床常用剂量相当）组，ig 给药，1 次/d，持续4 周。每周监测小鼠体质量（BM）及FBG。实验结束时，取血检测甘油三酯（TG）、总胆固醇（TCH）和14，15-EET 含量。以心肌肥厚指数（LVHI）、左心室/体质量比（LV/BM）和心房肽（ANF）表达为心肌肥厚检测指标，HE 和Masson 染色观察左心室组织病理学改变。逆转录定量PCR 和Western 印迹法分别检测左心室心肌组织中ANFmRNA 和细胞色素P450 表氧化酶2J3（CYP2J3）蛋白表达。结果  小鼠FBG 持续≥11.1 mmol•L-1，提示糖尿病形成。4 周后，糖尿病小鼠的LVHI，LV/BM 和ANF mRNA 表达增加（P<0.01），心肌结构损伤，出现心肌肥厚。实验结束时，TG 和TCH 含量增加（P<0.01）；同时，左心室心肌组织CYP2J3 表达下调，血清14，15-EET 含量减少（P<0.01）。给予BEZ 25 和75 mg•kg-1治疗后，FBG 均降低，TG 和TCH 亦减少（P<0.05）；但只有BEZ 75 mg•kg-1组小鼠心肌肥厚改善，CYP2J3 表达和14，15-EET 水平升高（P<0.05）。结论  临床相当剂量的BEZ 对糖尿病小鼠心肌肥厚有保护作用，该作用可能与CYP2J3-EET 激活有关。
  • 论著
    过表达Ubc9 酶对乳大鼠心肌细胞低氧损伤的保护作用
    陈秀会，宜全，肖青
    2018, 32(10): 772-781. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.005
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    目的  探讨类泛素样修饰蛋白（SUMO）修饰中的泛素缀合酶类E2I（Ubc9）对体外乳大鼠心肌细胞（NRCM）急性低氧损伤的作用及其可能的机制。方法  采用分离纯化细胞法培养NRCM，对NRCM 分别转染5，10，20，50 和100 感染指数（moi）的纯化的大鼠Ubc9 基因腺病毒（Adv-Ubc9），转染48 h 后在荧光显微镜下分别观察其绿色荧光蛋白（GFP）的荧光强度，并用Western 印迹法检测转染效率。NRCM 行氧葡萄糖剥夺（OGD）分别处理0，2，4，6，12 和24 h 后，Western 印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、自噬相关蛋白P62/SQSTM1（P62）和微管相关蛋白轻链3（LC3）的表达。NRCM 转染Adv-Ubc9 50 moi 48 h，使得Ubc9 过表达，随后OGD 处理6 h，建立心肌细胞急性低氧模型，利用原位末端转移酶标记（TUNEL）技术检测细胞凋亡，Western 印迹法检测Ubc9、活化的胱天蛋白酶3、P62、LC3和类泛素化修饰蛋白1（SUMO-1）的表达水平，蛋白免疫共沉淀法检测Vps34 和Beclin1 的SUMO 化修饰水平。NRCM 转染Ubc9 的小干扰RNA（Ubc9-siRNA）48 h，使Ubc9沉默，随后行OGD处理6 h，Western 印迹法检测活化的胱天蛋白酶3的表达水平。NRCM 给予巴伐洛霉素A1（BFA1）50 nmol•L-1作用2 h，Western 印迹法检测LC3 表达水平。结果  Adv-Ubc9 在50 与100 moi 时转染成功且效率一致，与单纯OGD 组相比，过表达Ubc9 能明显降低OGD 引起的心肌细胞凋亡（P<0.01）、降低活化的胱天蛋白酶3 的表达（P<0.01），而沉默Ubc9 使心肌细胞OGD 处理后的活化的胱天蛋白酶3 表达上调（P<0.05），说明过表达Ubc9 能抵抗OGD 引起的心肌细胞凋亡。与正常对照组相比，OGD 处理后，自噬底物P62 发生堆积（P<0.01），自噬蛋白LC3Ⅱ明显下调（P<0.05），自噬流出现障碍；当过表达Ubc9 后能明显逆转OGD 引起的自噬底物P62堆积（P<0.05），改善自噬流障碍，但对自噬蛋白LC3Ⅱ影响不明显。在此基础上给予BFA1 阻断自噬体与溶酶体融合过程后，与OGD+BFA1 组相比，Adv-Ubc9+OGD+BFA1 组的LC3Ⅱ表达明显上调（P<0.01），提示Ubc9 改善自噬流障碍的作用可能与同时促进自噬激活和自噬降解过程有关；蛋白免疫共沉淀结果显示，与正常对照组相比，OGD 处理后SUMO-1蛋白表达水平基本无变化，而过表达Ubc9 后，SUMO-1 蛋白表达明显上调（P<0.01），OGD 处理后，Vps34 和Beclin1 的SUMO 化修饰水平下调（P<0.01），而过表达Ubc9 后，Vps34 和Beclin1 的SUMO 化修饰明显上调（P<0.01），说明过表达Ubc9可能通过提高与自噬激活和自噬降解过程均相关的Vps34和Beclin1的SUMO化修饰，从而同时促进自噬激活和自噬降解过程改善OGD 后的自噬流障碍，进而抵抗OGD 引起的心肌细胞凋亡。结论  高表达Ubc9 酶能显著抑制OGD 导致的心肌细胞凋亡，该保护作用可能是增强了Vps34 和Beclin1 的SUMO 化修饰水平，从而同时促进自噬激活（形成自噬体）和自噬降解（自噬体与溶酶体融合）过程，进而改善OGD 后自噬流障碍。
  • 论著
    注射用灯盏花素对脂多糖致巨噬细胞炎症损伤的抑制作用
    齐睿娟，孙桂波，侯睿，高源，费巧玲，韩宜芯，周鸿，齐云
    2018, 32(10): 782-789. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.006
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    目的  研究注射用灯盏花素（BSI）对脂多糖（LPS）致巨噬细胞炎症损伤的抑制作用及其机制。方法  采用巨噬细胞集落刺激因子刺激小鼠骨髓细胞获得小鼠髓源巨噬细胞。BSI 6.25 ~ 400 mg•L-1（终浓度）与小鼠巨噬细胞RAW264.7 孵育24 h，MTT 法测定细胞存活率。将小鼠巨噬细胞RAW264.7 和髓源巨噬细胞与BSI 1.5625~50 mg•L-1和LPS 40 μg•L-1共孵育24 h，Griess 法测定上清炎症因子一氧化氮（NO）水平，ELISA 法测定肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）水平。ICR 雄性小鼠一次性ip 给予BSI 2.5，5 和10 mg•kg-1，0.5 h 后尾静脉注射LPS 5 mg•kg-1制备内毒素血症模型，给予LPS 3 h 后，测定血清NO，TNF-α 和IL-6 水平。将小鼠巨噬细胞RAW264.7 与BSI 1.5625 ~ 50 mg•L-1和LPS 40 μg•L-1共孵育24 h，L-012 荧光染色法测定胞内活性氧簇（ROS）浓度，JC-1 荧光染色法检测胞内线粒体膜电位（MMP）水平，荧光素酶催化底物荧光素发光反应检测胞内ATP 水平，光泽精化学发光法检测胞内NADPH 氧化酶活性。还原型辅酶Ⅰ（NADH Ⅰ）-吩嗪硫酸甲酯（PMS）体系还原氮蓝四唑（NBT）法测定BSI 清除超氧阴离子的作用。结果  BSI<100 mg•L-1时对RAW264.7 细胞存活率无影响。BSI 25 和50 mg•L-1可降低巨噬细胞RAW264.7上清NO 含量（P<0.01），BSI 1.5625~50 mg•L-1对小鼠巨噬细胞RAW264.7 和髓源巨噬细胞上清中TNF-α 和IL-6 均无明显抑制作用；BSI 1.5625~50 mg•L-1对小鼠髓源巨噬细胞上清NO，TNF-α 和IL-6 水平均无明显抑制作用。在LPS 致内毒素血症小鼠模型上，BSI 2.5，5 和10 mg•kg-1对LPS 诱导的血清NO，TNF-α 和IL-6 升高也无明显抑制作用。BSI 可显著抑制LPS 所致RAW264.7 细胞胞内ROS 上升，并对抗MMP 与ATP 的下降（P<0.01）。进一步机制研究表明，BSI 1.5626~50 mg•L-1可显著抑制LPS所致RAW264.7 细胞NADPH 氧化酶活性升高（P<0.01）；另外，BSI 3.125~50 mg•L-1具有清除超氧阴离子的作用（P<0.01）。结论  虽然BSI 对LPS诱导体内外炎症无明显抗炎作用，但可通过抑制LPS 所致胞内ROS升高而保护线粒体功能，发挥细胞保护作用。
  • 论著
    槲皮素诱导肿瘤细胞P53非依赖的G2/M周期阻滞和凋亡
    王梓萱，周静，唐玥，石欢，黄晓薇，邓敬桓，胡晓晓，陈攀红，李忠杰，戴惠淇，冯吉，Sayantan CHATTERJEE，卢国栋
    2018, 32(10): 790-796. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.007
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    目的  研究槲皮素对肿瘤细胞的增殖、周期和凋亡的影响。方法  用槲皮素12.5，25，50 和100 μmol•L-1，分别作用于人肝癌HepG2和Hep3B细胞、人乳腺癌MDA-MA-231细胞、人结肠癌HCT116 p53野生型（HCT116 p53WT）和p53 敲除型（HCT116 p53KO）细胞12，24 和48 h。荧光显微镜观察细胞形态变化；MTT 法测定细胞存活率；采用Hoechst33258 染色观察细胞核染色质的变化；采用流式细胞术检测细胞周期的变化；Western印迹法检测胱天蛋白酶3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）蛋白水平的变化。结果  槲皮素对肿瘤细胞增殖的抑制作用显著且呈浓度（rHepG2=0.972，P<0.01；rHep3B=0.959，P<0.01；rMDA- MB- 231=0.979，P<0.01；rHCT116p53WT=0.983，P<0.01；rHCT116p53KO=0.980，P<0.01）和时间（rHepG2=0.974，P<0.01；rHep3B=0.956，P<0.01；rMDA-MB-231=0.959，P<0.01；rHCT116p53WT=0.971，P<0.01；rHCT116p53KO=0.988，P<0.01）依赖性，与细胞对照组相比，槲皮素处理组细胞数量明显减少。槲皮素诱导G2/M 周期阻滞（P<0.01）；镜下观察见核染色质浓缩和碎裂等典型的凋亡特性（P<0.01）。Western印迹法结果显示，胱天蛋白酶3蛋白表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），活化的胱天蛋白酶3表达水平无显著变化，PARP表达水平明显降低（P<0.01），活化的PARP明显升高（P<0.01）；在加入泛胱天蛋白酶抑制剂后，与槲皮素单独作用相比，胱天蛋白酶3和PARP蛋白表达水平升高，活化的PARP 表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01，P<0.05）。结论槲皮素能通过诱导P53非依赖性的G2/M细胞周期阻滞和细胞凋亡，从而实现对肿瘤细胞增殖的抑制作用。
  • 论著
    烟碱对4-（N-甲基-亚硝胺）-1-（3-吡啶基）-1-丁酮和N′-亚硝基去甲烟碱体外细胞色素P4502A13酶促代谢反应的抑制作用
    刘蔚，李椿方，石全波
    2018, 32(10): 797-804. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.008
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    目的  研究烟碱对4-（N-甲基-亚硝胺）-1- （3-吡啶基）-1-丁酮（NNK）和N-亚硝基去甲烟碱（NNN）的体外代谢激活是否产生抑制作用。方法  分别以NNK和NNN为底物，采用体外重组酶细胞色素P450酶（CYP450）2A13体系进行孵育，以HPLC-MS-MS检测NNK和NNN及其代谢产物，建立体外孵育NNK和NNN的酶促反应动力学曲线，分析烟碱对其酶促动力学参数的影响。结果  CYP4502A13酶催化NNK生成4-羰基-4- （3-吡啶基）-丁醛（OPB），4-羟基-1-（3-吡啶基）-1-丁酮（HPB）和4-羰基-4- （3-吡啶基）-氧代丁酸（OPBA），该酶催化NNN生成HPB，OPB和4-羟基-4- （3-吡啶基）-氧代丁酸（HA）。烟碱加入NNK反应液中，生成OPB，HPB和OPBA的Km值分别增加到7.4，13.1和11.0 μmol•L-1 ，Vmax值保持不变。烟碱加入NNN反应液中，生成HPB，HA和OPB的Km值分别增加到35.46，16.51和28.19 μmol•L-1，Vmax值保持不变。结论 烟碱对CYP4502A13酶催化NNK和NNN的代谢反应具有竞争性抑制作用。
    • 综述
  • 综述
    长链非编码RNA在肺纤维化中作用机制的研究进展
    周俊海，黄瑞雪
    2018, 32(10): 805-809. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.009
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    长链非编码RNA（lncRNA）在转录及转录后等多个层次调控基因的表达，有望为肺纤维化治疗提供新的作用靶点。近年来，有关lncRNA在肺纤维化中作用机制的研究主要围绕3个方面展开：一是lncRNA参与上皮细胞间充质转化（EMT）相关信号通路及通过竞争性结合微RNA调控EMT进程，二是lncRNA参与调控纤维化炎性-免疫反应进程，三是lncRNA参与调控凋亡过程。本文综述以上机制的研究进展，为探索肺纤维化治疗途径提供参考。
  • 综述
    微RNA与肠道菌群失调及与肠道疾病的关系
    何 丽，周 瑶，孙 强，黄瑞雪
    2018, 32(10): 810-815. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.010
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    近年来，微RNA（miRNA）的表达水平变化与肠道菌群失调在肠道疾病中的作用越来越受到重视。研究发现，miRNA和肠道菌群之间存在相互调控关系，在炎症性肠病、肠易激综合征以及结直肠癌等疾病的发生发展中起重要作用。本文就miRNA表达水平变化和肠道菌群失调的关系，以及肠道菌群失调与miRNA表达水平变化在肠道疾病中的作用近年相关研究进展进行综述，可作为肠道疾病诊断、治疗的候选miRNA，为肠道疾病研究提供参考。
  • 综述
    多药耐药相关ABC转运蛋白信号转导通路研究进展
    沈晓玲，杨志宏
    2018, 32(10): 816-826. https://doi.org/10.3867/j.issn.1000-3002.2018.10.011
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    ATP结合盒（ABC）转运蛋白表达和功能的异常是造成多药耐药（MDR）的重要原因之一，其中P-糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白和MDR相关蛋白在MDR发生中起着重要作用，是ABC转运蛋白家族中研究热点。本文对近几年来这3种转运蛋白相关信号转导通路进行整理分析，如NF-κB信号通路、丝裂原活化蛋白激酶级联信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路和音猬因子（sonic hedgehog）信号通路等，挖掘出信号通路中重要调控节点NF-κB、激活蛋白1、c-Jun和转录因子Gli等，具有成为MDR逆转剂作用靶点的可能性，以期为MDR机制研究及其逆转剂研发提供较系统的参考。