论著
马 健，杨艳茹，刘景景，李芳芳，陈美华，王 浩，王 蕾，孙立立，王凤泽，王德才,张汉霆
目的 探讨抗抑郁药地昔帕明 （DMI） 对人脑胶质瘤耐药细胞 （U251/TR） 对替莫唑胺 （TMZ） 耐药作用 的影响及其机制。方法 DMI 20~80 μmol•L-1或TMZ 0.5~10 mmol•L-1处理U251/TR细胞24 h， 用CCK-8法 测定DMI和TMZ对U251/TR细胞增殖抑制的半数有效量 （IC50）。CCK-8检测TMZ （1和2 mmol•L-1） 和 DMI （20， 30和 40 μmol•L-1）联合或单独处理 U251/TR细胞 24 h对细胞增殖抑制的影响， 用金正均法计算 Q值 来评价两种药物的协同效应。TMZ （1 mmol• L-1） 和 DMI （30 μmol•L-1） 联合或单独处理U251/TR细胞24 h， 以 Hoechst33258 染色观察细胞核形态， 发光法检测胱天蛋白酶 3 活性； 实时定量 PCR 和 Western 蛋白印迹法检测 C/EBP 同源蛋白（CHOP）的表达； 小干扰 RNA（siRNA）沉默 CHOP 的表达后， 观察 TMZ （1 mmol•L- 1）和 DMI（30 μmol•L- 1）联合给药对 U251/TR 增殖抑制的影响。结果 DMI 或 TMZ 单用对 U251/TR细胞增殖均有明显的抑制作用， 并且呈浓度依赖性 （r 2=0.983， 0.982， P<0.05）， IC50分别为 （33.6± 0.5） μmol• L-1和（2.5 ± 0.6） mmol• L-1。TMZ（1和 2 mmol•L-1）和 DMI（20， 30和 40 μmol•L-1）联合给药能 24 h 对 U251/TR 细胞的增殖抑制率明显强于单独给药， 以金正均法计算联合给药的 Q 值均>1.15， 证实 TMZ和DMI联合给药具有协同效应。同时， DMI 30 μmol•L-1和 TMZ 1 mmol•L-1联和应用可诱导U251/TR 细胞凋亡， 主要表现为细胞核固缩、 染色质沉积和胱天蛋白酶3的激活。这种凋亡诱导作用明显好于单独给 药的效果（P<0.05）。DMI 和 TMZ 联合应用能显著激活细胞内质网应激标志蛋白 CHOP 的表达（P< 0.05）。以siRNA沉默CHOP表达后， DMI逆转TMZ耐药的作用明显减弱， 联合给药组细胞生存率由51.8% 升至 62.2%（P<0.05）。结论 DMI能逆转人脑胶质瘤细胞 U251/TR对 TMZ的耐药性， 其机制可能与激活CHOP表达有关。
