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• 2008年, 第22卷, 第1期
  刊出日期：2008-02-25

    

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论著
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  论著

  人参茎叶皂苷预适应对自发性高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

  宋 清;张晓文;徐志伟;陈建文;唐富天

  2008, 22(1): 42-48.

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  目的 研究人参茎叶皂苷（GSLS）预适应对自发性高血压大鼠(SHR)心肌缺血再灌注损伤(I-R)的保护作用及可能机制。方法 SHR于I-R造模前每日1次灌胃给予GSLS 50和100 mg·kg^-1，连续3周，于缺血40 min和再灌注30 min内测定大鼠血压、心功能和心脏血流动力学指标，生化方法测定心肌ATPase酶、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和NO含量，镉血红素饱和法测定心肌和肝脏金属硫蛋白（MT）含量，免疫组化方法测定细胞热休克蛋白70（HSP70）表达。结果 GSLS 50和100 mg·kg^-1预适应组显著改善I-R损伤SHR的心率、左室内压峰值和左室内压最大变化速率(±dp/dt_max)，明显提高心肌ATPase活性，减少LDH漏出，提高心肌SOD活性，增加NO含量，降低MDA含量，增加心肌和肝脏MT含量，增加心肌HSP70阳性细胞百分数。结论 GSLS预适应对心肌I-R损伤具有保护作用，其作用机制与改善SHR心肌舒缩功能，改善心肌代谢，增强抗氧化活性和诱导内源性心肌保护物质的释放有关。
  
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  论著

  甘草次酸和苦参碱对实验性急性胆管消失综合征的防治作用

  席景砖;王守英;赵晓霞;张付美;翟德胜;赵 营;陈西敬

  2008, 22(1): 49-54.

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  目的 探讨甘草次酸（GA）和苦参碱（MT）对急性胆管消失综合征（AVBDS）的防治作用，为AVBDS的药物治疗提供实验依据。方法 应用异硫氰酸-1-萘酯（ANIT）制备大鼠AVBDS模型。预防性给药，分别给大鼠ip GA, MT和地塞米松（DEX）（均10 mg·kg^-1），每12 h给药1次，共4次，第2次给药后30 min给予ANIT造模。治疗性给药，在造模后3或12 h给予GA, MT或DEX，每12 h给药1次，共2次。同时设正常对照组和ANIT模型组。所有动物在造模后36 h进行胆排泄实验测定2 h胆汁流量和胆汁中酮洛芬葡萄糖醛酸结合物（KPG）累计胆排泄率, 随后观察肝功能生化指标和肝组织病理改变。结果 造模前给予DEX明显减轻胆管损伤，对肝细胞损伤无作用。造模后3 h给予DEX不能减轻AVBDS，造模后12 h给予DEX，大鼠血清谷丙转氨酶（GPT）活性较模型组升高，并伴有严重的汇管区胆管消失和灶状肝细胞坏死。造模前、造模后3 h分别给予GA或MT，均不同程度地改善ANIT诱导的血清总胆红素（Tbil）水平升高，GPT、碱性磷酸酶和γ-谷酰转移酶活性升高，以及胆汁流量及KPG胆汁累计排泄减少。造模后12 h给予GA和MT，对ANIT所致肝损伤无明显改善作用。结论 在实验性AVBDS早期，GA和MT对AVBDS具有一定的防治作用，且在一定程度上优于DEX。
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  论著

  抑制生长因子受体连接蛋白-2表达对乳癌细胞生长的影响

  叶韵斌;陈慧菁;刘 枋;李洁羽;陈 强

  2008, 22(1): 55-62.

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  目的 进一步验证生长因子受体连接蛋白-2（Grb2）的表达在乳癌发展中的作用。方法 应用脂质体转染技术将Grb2小干扰RNA（siRNA）转染至乳癌细胞SKBr3中，台盼蓝计数法测定存活细胞数, TUNEL技术和Annexin Ⅴ/PI染色分析转染后细胞的凋亡，免疫细胞化学技术分析转染后细胞Grb2的表达。Western蛋白质印迹法测定Grb2、细胞外信号调节激酶 (p42/44 ERK)、磷酸化p42/44 ERK(P-p42/44 ERK)、原癌基因蛋白质c-akt（Akt）、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT 5转录因子表达的改变。流式细胞术检测细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）3的表达。结果 台盼蓝计数法结果显示，转染Grb2 siRNA可有效抑制SKBr3的生长。TUNEL实验显示，Grb2 siRNA转染SKBr3细胞后，随着时间延长，凋亡细胞明显增加。Annexin Ⅴ/PI测定结果亦提示，Grb2的抑制可明显诱导SKBr3细胞凋亡。转染48 h后，SKBr3的活化caspase 3表达水平由0.99%升至17.43%。免疫组化染色表明，Grb2 siRNA转染细胞后，SKBr3细胞Grb2表达明显下降，由转染24 h后的下降至转染72 h后的+～－。Western蛋白质印迹分析证实，Grb2的抑制可导致SKBr3细胞P-p42/44 ERK，P-Akt以及STAT 5表达明显下降。P-p42 ERK与p42 ERK的相对吸光度值之比由未转染的（60±17）％下降至转染24 h后的（38±13）％，及转染48 h后的（21±8）％；P-p44 ERK与p44 ERK的相对吸光度值之比, 由未转染时（104±16）％，分别下降至（49±13）％及（30±10）％；P-Akt与Akt的相对吸光度值之比由未转染的(40±6)%下降至(32±10)%和(15±4）％。与未转染组相比，转染24及48 h后STAT 5相对吸光度值分别下降为(64±6)%和(52±14)%。结论 抑制Grb2的表达可抑制乳癌细胞生长并诱导细胞凋亡。
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  论著

  蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

  姜 峰;邓旭明;韩小虎;王大成;赵文杰;宋 宇;张金子

  2008, 22(1): 63-68.

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  目的 对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法 用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞（M_ф）能量代谢水平，中性红吞噬法测定腹腔M_ф的吞噬功能，流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果 蟾酥各萃取层中的水层（VB₂）、乙酸乙酯层（VB₄）及总水提蛋白层（VB₆）分别在1.25~30、10~20 和10~40 mg·L^-1浓度范围内增强刀豆蛋白A（Con A）诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应；其他3组(VB₁, VB₃和VB₅)蟾酥提取物单独作用或与Con A联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响；VB₂, VB₄和VB₆在1.25~40 mg·L^-1浓度范围内可增强Con A诱导的小鼠腹腔M_ф能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10 mg·L^-1时，VB₂, VB₄和VB₆可协同Con A增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率，并降低CD4⁺CD8^-和CD4^-CD8⁺、增加CD4⁺CD8⁺ T淋巴细胞亚群百分率。结论 蟾酥不同溶剂萃取物VB₂, VB₄和VB₆体外可协同Con A促进脾淋巴细胞和腹腔M_ф的免疫功能，其机制可能与协同Con A促进DNA合成并活化CD4⁺CD8^- T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4⁺CD8⁺ T淋巴细胞亚群的数量有关。
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  论著

  银杏外种皮多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠免疫反应的调节作用

  许爱华;任 莉;郑媛媛;陈华圣

  2008, 22(1): 69-72.

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  目的 研究银杏外种皮多糖（GBEP）对环磷酰胺(CPA)所致免疫抑制模型小鼠细胞免疫及体液免疫的调节作用。方法 将ICR小鼠随机分为对照组、模型组及3个GBEP治疗组。模型组ip CPA 40 mg·kg^-1，同时ig等体积生理盐水（NS）；治疗组分别ig GBEP 50，100和200 mg·kg^-1，同时ip CPA 40 mg·kg^-1；对照组分别ig和ip等体积NS。每日1次，连续给药5 d。于d 6采用葡萄球菌A蛋白花环法测定小鼠外周血T淋巴细胞亚群，采用双抗体夹心ABC-ELISA法测定小鼠血清可溶性白细胞介素-2受体（sIL-2R）含量，采用MTT法检测小鼠脾脏T细胞IL-2活性，采用免疫比浊法测定小鼠血清免疫球蛋白(Ig)的含量。结果 模型组小鼠外周血CD3⁺ T细胞及CD4⁺ T细胞百分率下降，血清中sIL-2R含量升高，脾脏T细胞产生IL-2被抑制，血清中IgM，IgG和IgA含量减少。GBEP 3个剂量均可提高模型小鼠外周血CD3⁺和CD4⁺ T细胞百分率，降低血清sIL-2R含量，促进脾脏T细胞IL-2活性以及血清IgM，IgG和IgA的生成。结论 GBEP可调节CPA抑制的小鼠细胞免疫及体液免疫功能。
综述
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  综述

  纳米二氧化钛的毒理学研究进展

  王 燕;康现江;穆淑梅

  2008, 22(1): 77-80.

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  纳米二氧化钛与人体有广泛的接触。不同粒径的纳米二氧化钛随产品以各种不同的途径进入人体，对其毒性的研究迫在眉睫。纳米二氧化钛一旦进入机体后，可以导致各个脏器不同程度的损伤，对肺部的损伤表现为炎症、纤维化甚至导致肿瘤的发生；纳米二氧化钛还可以导致血管内皮细胞的损伤，脑组织的脂肪变性，肝脏水肿和肝小叶坏死，肾小球肿胀等；二氧化钛进入细胞后，细胞对它的清除能力会随着二氧化钛粒径缩小而下降，并且会对细胞造成细胞膜的破坏，细胞核DNA的损伤和断裂，以及有关蛋白质的含量和酶活性的变化。
实验方法
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  实验方法

  人淀粉样蛋白前体695基因及人烟碱乙酰胆碱受体α4β2亚单位基因共表达细胞模型的构建

  聂惠贞;李佐青;沈颖华;黄 旭;王 鑫;韩燕飞;殷 明

  2008, 22(1): 73-76.

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  目的 为满足寻找可能影响淀粉样β蛋白(Aβ) 在阿尔茨海默病过程中的药物实验的需求, 建立共表达人淀粉样蛋白前体（APP）695基因和烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)α4β2亚单位基因的细胞模型。方法 用脂质体转染方法把APP 695基因转染进已稳定转染nAChR α4β2亚单位基因的SH-EP1细胞。用500 mg·L^-1 G418加压筛选，并挑选细胞单克隆。用RT-PCR和Western蛋白印迹法对转染后的细胞单克隆进行鉴定，挑取成功转染并高表达APP 695的细胞进行克隆。膜片钳检测所挑细胞克隆的α4β2受体功能。结果 挑出成功稳定转染人APP 695基因及人nAChR α4β2亚单位基因的共表达细胞克隆株。膜片钳方法检测到此细胞克隆株上nAChR α4β2存在活性。结论 成功制备了共表达人APP 695基因及人nAChR α4β2亚单位基因的细胞模型，为探讨神经元nAChR α4β2亚型对Aβ加工影响的药物实验提供了条件。
论著
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  论著

  甲胺对兔心血管内皮的慢性毒性

  罗文英;林哲绚;李 慧;罗文鸿

  2008, 22(1): 24-30.

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  目的 探讨甲胺在体内慢性分布是否导致氨基脲敏感胺氧化酶（SSAO）活性上调从而诱导心血管内皮损伤。方法 新西兰兔灌胃给予甲胺100 mg·kg^-1，每日1次，连续6个月，隔周称量体重调整给药量。分析动脉血中循环内皮细胞数、血清NO浓度和主动脉内皮细胞的超微结构。高效液相色谱法检测血浆SSAO活性及甲醛浓度。结果 甲胺组兔动脉血中内皮细胞数、血清NO浓度、血浆SSAO活性及甲醛浓度明显增高。主动脉内皮细胞超微结构显示核内大量包函体、核浓缩和核分裂等病理形态学改变。结论 低剂量甲胺在体内慢性分布能够诱导SSAO活性上调而引起心血管内皮损伤。
  
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  论著

  小补心汤总黄酮对强迫游泳和获得性无助模型动物的抗抑郁作用

  张有志;于能江;袁 莉;安 磊;;赵毅民;肖文彬;罗质璞;李云峰

  2008, 22(1): 1-8.

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  目的 小补心汤（XBXT）由代赭石、旋覆花、竹叶和淡豆豉4味中药组成，文献记载其有缓解抑郁情绪的作用。本实验研究其总黄酮提取物（XBXT-2）是否具有抗抑郁作用。方法 采用大、小鼠强迫游泳模型和大鼠获得性无助模型观察XBXT-2的抗抑郁作用，采用酶联免疫法检测获得性无助大鼠血清皮质酮水平，并观察XBXT-2对小鼠自发活动的影响。结果 单次灌胃给予XBXT-2 50和100 mg·kg^-1可以显著缩短小鼠和大鼠强迫游泳的不动时间。连续4 d灌胃给予XBXT-2 25和50 mg·kg^-1可以显著减少获得性无助模型大鼠的逃避失败次数，并显著降低其血清皮质酮水平。XBXT-2 50~200 mg·kg^-1对正常小鼠的自发活动性无明显影响。结论 XBXT-2在抑郁动物模型上具有抗抑郁样作用，其机制可能与其抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进有关。
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  论著

  人参皂苷Rg1对铅所致大鼠海马CA1区长时程增强损伤的影响

  娄志义;汪 铭;罗云云;阮迪云

  2008, 22(1): 17-23.

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  目的 研究人参皂苷Rg1对铅引起的大鼠海马CA1区长时程增强(LTP)的损伤是否有修复作用。方法 Wistar大鼠从出生至断奶通过母乳摄入铅（母鼠每天饮用0.2%醋酸铅溶液20 mL），在出生后的20~25 d记录其海马CA1区兴奋性突触后电位并诱导长时程增强。结果 人参皂苷Rg1(50 μmol·L^-1)灌流对照组和铅暴露组大鼠海马脑片20 min均能诱导出LTP，铅暴露组大鼠的LTP幅度较对照组低。在铅暴露组大鼠的海马脑片上，高频刺激（HFS，1 s，100 Hz）诱导的LTP较对照组显著降低, 50 μmol·L^-1人参皂苷Rg1灌流20 min，HFS诱导的LTP幅度提高47.1%。结论 人参皂苷Rg1能够提高基础的突触传递，并能部分修复铅损伤的HFS-LTP。
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  论著

  淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35所致大鼠学习记忆障碍的改善作用

  聂 晶;罗 勇;黄燮南;陆远富;孙安盛;龚其海;石京山;

  2008, 22(1): 31-37.

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  目的 观察淫羊藿苷对淀粉样β蛋白片段25-35（Aβ_25-35）所致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠学习记忆能力的保护作用，并探讨其可能的作用机制。方法 Wistar雄性大鼠，右侧海马内注射Aβ_25-35 10 μg制备AD模型，次日起淫羊藿苷30, 60和120 mg·kg^-1灌胃给药，连续14 d，d 15~19 Morris水迷宫检测大鼠空间辨别学习记忆能力；d 20检测海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、超氧化物歧化酶（SOD）及一氧化氮合酶（NOS）的活性，免疫组化法检测海马内乙酰胆碱酯酶（AChE）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）的表达。结果 与模型对照组比较，淫羊藿苷给药14 d明显改善大鼠学习记忆能力；海马组织中SOD和GSH-PX活性升高，NOS活性降低；海马内AChE及ChAT的表达增加。结论 淫羊藿苷可以改善Aβ25-35海马内注射所致AD模型大鼠的学习记忆能力，其作用可能与其增加AChE和ChAT表达，增强SOD和GSH-PX等自由基清除酶活性，降低NOS活性，减少NO释放等多种机制，促进胆碱能递质系统功能的恢复有关。
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  论著

  丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A在缺氧预处理诱导人脐静脉内皮细胞耐受中的作用

  周 荣;刘良明;胡德耀;周学武;李东红

  2008, 22(1): 9-16.

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  目的 研究丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1/2A(PP1/2A)在调节人脐静脉内皮细胞（HUVEC）对缺氧耐受相关信号转导中的作用。方法 采用缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受。采用细胞存活率、乳酸脱氢酶（LDH）释放及总抗氧化能力（T-AOC）评价HUVEC的耐受性。免疫细胞化学联合蛋白质印迹法检测核因子E2相关因子2（Nrf2）的亚细胞定位。蛋白质印迹法检测应激蛋白血红素氧合酶1（HO-1）的表达。结果 缺氧90 min导致HUVEC存活率及T-AOC降低，LDH释放增加。缺氧预处理（缺氧10 min 后4, 8及24 h）可提高HUVEC对随后缺氧90 min的耐受，细胞存活率及T-AOC较缺氧组显著提高，LDH释出显著降低，并诱导Nrf2由胞浆向胞核移位，上调其下游信号分子HO-1的表达。缺氧预处理前用PP1/2A特异性抑制剂冈田酸（40 nmol·L^-1）孵育HUVEC 10 min可部分抑制缺氧预处理诱导的Nrf2向核移位、HO-1表达及细胞耐受性。结论 PP1/2A至少部分参与缺氧预处理诱导HUVEC对缺氧损伤的耐受，其机制可能与调节Nrf2向核移位及HO-1表达有关。
  
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  论著

  超低分子肝素对原代培养大鼠大脑皮质神经元化学诱导损伤的保护作用

  于天贵;王韦玮;张庆柱;姬胜利

  2008, 22(1): 38-41.

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  目的 探讨超低分子肝素（ULMWH）对不同化学诱导损伤大脑皮质神经元的保护作用。方法 谷氨酸、叠氮钠、KCl和咖啡因诱导损伤原代培养的大鼠大脑皮质神经元，观察神经元存活率、培养液中乳酸脱氢酶（LDH）漏出量及细胞内游离钙离子浓度(［Ca²⁺］_i)。结果 ULMWH（0.01~1.0 mg·L^-1）预处理24 h可显著提高谷氨酸损伤神经元的存活率，降低细胞LDH的漏出量和［Ca²⁺］_i，高浓度（1.0 mg·L^-1）时对叠氮钠引起的神经元损伤也有一定的保护作用，但对咖啡因和KCl所致的神经元损伤无影响。结论 ULMWH对谷氨酸和叠氮钠所致大鼠大脑皮质神经元损伤有一定的保护作用，可能与其抑制［Ca²⁺］_i升高有关；但不能对抗KCl和咖啡因所致的皮质神经元损伤。