论著
王子晗, 莘裕辰, 楼 凯, 沈方敏, 王钰婷, 鲍欣怡, 章璐冰, 张 云
目的 探讨青蒿琥酯（Art）对氟化钠（NaF）所致骨细胞MLO-Y4损伤的改善作用及其分子机制。方法 NaF（2 mmol·L-1）与MLO-Y4细胞共孵育 48 h，构建MLO-Y4细胞损伤模型。细胞分为细胞对照组、NaF 组及NaF+Art 0.25，0.50和1.00 μmol·L-1组（Art预孵育2 h后，加NaF继续孵育12或48 h）。MTT法检测细胞存活率。钙黄绿素乙酰甲酯（calcein-AM）染色观察细胞活性。 化学比色法检测乳酸脱氢酶（LDH）水平，DCFH-DA染色检测活性氧（ROS）水平，化学比色法检测丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，Hoechst33342染色和Annexin-V/PI染色分析细胞凋亡，JC-1染色检测线粒体膜电位（MMP），Lyso-Tracker和Mito-Tracker染色观察自噬泡形成和线粒体形态，荧光素酶法检测腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量，免疫荧光染色检测微管相关蛋白轻链3（LC-3）在线粒体中的表达，Western印迹法检测LC-3、p62、PTEN诱导假定激酶1（PINK1）和E3泛素-连接酶（Parkin）蛋白表达水平。结果 与细胞对照组比较，NaF组细胞存活率和细胞活性显著降低（P<0.01），LDH含量、ROS水平、MDA含量、细胞凋亡率和自噬泡形成明显增加（P<0.01），PINK1和Parkin蛋白表达增加（P<0.01），LC3在线粒体中的表达增加且LC-3Ⅰ向LC-3Ⅱ转换增加（P<0.01），SOD活性、MMP水平、ATP水平和P62蛋白表达显著降低（P<0.05，P<0.01）。与NaF 组比较，NaF+Art 0.25，0.50和1.00 μmol·L-1组细胞活性和存活率显著增加（P<0.01），LDH含量、ROS水平、MDA含量、细胞凋亡率和自噬泡形成明显减少（P<0.05，P<0.01），PINK1和Parkin蛋白表达下降（P<0.01），LC3在线粒体中的表达下降且LC-3Ⅰ向LC-3Ⅱ转换减少（P<0.01），SOD活性、MMP、ATP水平和P62蛋白表达显著增加（P<0.05，P<0.01）。结论 Art对NaF所致MLO-Y4细胞氧化损伤具有改善作用，其机制可能与减少细胞凋亡和线粒体自噬水平有关。
