论著
徐静蕾, 胡伊乐, 杨佳文, 朱心雨, 李 静, 霍梦惠, 刘 玲
目的 研究一氧化氮（NO）供体JS-K经蛋白磷酸酶2A（PP2A）调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶 B（PI3K/Akt）信号通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制。方法 设立细胞对照组（二甲亚砜<0. 01%）、JS-K 2.5，5.0和10.0 μmol·L-1组、LY294002 （PI3K抑制剂）10 μmol·L-1组、冈田酸（OA）（PP2A抑制剂）1 nmol·L-1组、2-（4-羧苯基）-4，4，5，5-四甲基咪唑烷-1-氧-3-氧化钾（羧基-PTIO） 50 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组，处理HepG2细胞24 h，DAPI染色观察细胞形态学变化；流式细胞仪检测细胞凋亡率； Western 印迹法检测PP2A蛋白磷酸化水平及PI3K、Akt和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）蛋白磷酸化水平。结果 DAPI染色结果显示，与细胞对照组相比，JS-K 2.5~10.0 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组具有细胞染色质浓缩、核碎裂等凋亡特征的细胞数增加。与JS-K 10.0 μmol·L-1组相比，
JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组凋亡特征的细胞数增加，JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组凋亡特征的细胞数减少。流式结果显示，与细胞对照组相比，JS-K 2.5~10.0 μmol·L-1、JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。与JS-K 10.0 μmol·L-1组相比，JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组细胞凋亡率显著升高（P<0.05），JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组细胞凋亡率显著下降（P<0.01）。Western 印迹法结果显示，与细胞对照组相比，OA 1 nmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著升高（P<0.05），JS-K 2.5，5.0和10.0 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+LY294002 10 μmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05，P<0.01）；PI3K，Akt和mTOR蛋白磷酸化水平均显著降低（P<0.05，P<0.01）。与JS-K 10.0 μmol·L-1组相比，JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组和JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组PP2A蛋白磷酸化水平显著增加（P<0.01）；JS-K 10.0 μmol·L-1 +LY294002 10 μmol·L-1组PI3K、Akt和mTOR蛋白磷酸化水平显著降低（P<0.05），JS-K 10.0 μmol·L-1+OA 1 nmol·L-1组、JS-K 10.0 μmol·L-1+羧基-PTIO 50 μmol·L-1组细胞PI3K，Akt和mTOR蛋白磷酸化水平均显著升高（P<0.05，P<0.01）。结论 NO供体JS-K通过在HepG2细胞内释放NO，降低PP2A磷酸化水平而活化PP2A，进一步降低PI3K，Akt和mTOR蛋白磷酸化水平，抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路而诱导肝癌细胞凋亡。
