论著
马君梅， 南海函， 胡志妍， 陈依尔， 崔燕华， 陈星驰， 李 莉， 苏 颖， 梅虹霞， 缪项慧， 张旭彤， 林 函
目的 探讨BVT-14225（BVT）通过抑制11β-羟基类固醇脱氢酶1（11β-HSD1）的还原活性对神经干细胞（NSC）增殖、分化和迁移的影响。方法 取孕15 d SD胎大鼠的大脑皮质，分离培养原代NSC，采用免疫荧光染色法对NSC标志物巢蛋白和性别决定基因相关转录因子2（Sox2）进行染色，鉴定原代细胞；逆转录聚合酶链反应及核酸凝胶电泳法检测11β-HSD1 mRNA在NSC上的表达。细胞随机分为5组：细胞对照组（培养48 h）、溶剂对照组（0.1% DMSO孵育48 h）、DHC模型组（DHC 10.0 μmol·L-1处理48 h）、BVT对照组（BVT 10.0 μmol·L-1 处理48 h）和BVT干预组（BVT 10 μmol·L-1 处理1 h后再给予DHC 10.0 μmol·L-1 ，继续处理48 h）。5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）细胞增殖试剂盒检测NSC的增殖能力；乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测细胞毒性；超高效液相色谱-质谱（UPLC-MS）检测11β-HSD1酶的还原活性；Western印迹法检测11β-HSD1蛋白表达水平；胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和神经元核抗原（NeuN）抗体免疫荧光染色检测NSC的分化能力；划痕实验检测NSC的迁移能力。结果 巢蛋白和Sox2免疫染色鉴定原代培养细胞为NSC，核酸凝胶电泳条带图证明11β-HSD1 mRNA在NSC定性表达。LDH释放实验结果显示，DHC 10.0 μmol·L-1和BVT 10.0 μmol·L-1对NSC均无毒性作用。UPLC-MS实验结果显示，BVT 10.0 μmol·L-1能显著降低11β-HSD1的还原活性（P<0.01）。Western 印迹结果显示，DHC 10.0 μmol·L-1和BVT 10.0 μmol·L-1均不改变11β-HSD1蛋白表达水平。EdU实验结果显示，DHC 10.0 μmol·L-1可抑制NSC增殖（P<0.01），但BVT 10.0 μmol·L-1预处理可显著缓解DHC 10.0 μmol·L-1对NSC增殖的抑制（P<0.05）。GFAP和NeuN的免疫荧光染色实验结果表明，DHC 10.0 μmol·L-1和BVT 10.0 μmol·L-1均不影响NSC分化。划痕实验结果显示，DHC 10.0 μmol·L-1不影响NSC的迁移，但BVT 10.0 μmol·L-1预处理可显著促进NSC迁移（P<0.05）。结论 糖皮质激素浓度显著升高时，BVT可通过抑制NSC 11β-HSD1的还原活性促进NSC增殖和迁移，但对分化无影响。
