论著
周娜，刘伟江，李苹，孟祥宇，王洋，王鹏，樊月，刘元林，李雪，郑荣秀，张毅
目的 探讨间充质干细胞（MSC）减轻1型糖尿病（T1DM）小鼠炎症反应的作用机制。方法 从7日龄小鼠股骨和胫骨分离并培养MSC，应用流式细胞术检测MSC 表面标志物Sca-1，CD29，CD105，CD31，CD34，CD45，Ia 和CD11b，并采用油红O 染色检测体外成脂诱导分化，碱性磷酸酶染色检测成骨诱导分化，实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测成脂和成骨关键转录因子，以鉴定分离培养的MSC。6 周龄C57BL/6J雄性小鼠ip 给予链脲佐菌素50 mg•kg-1，每天1 次，连续5 d，制备T1DM 小鼠模型，于制备成功后第1 和第15 天分别尾静脉注射MSC（每只5×105 MSC）。第1 次MSC 治疗后，每周检测小鼠随机血糖和体质量，治疗4 周后取胰腺组织和腹腔巨噬细胞，采用HE 染色法检测胰腺组织病理变化，免疫组化法检测胰岛素分泌和巨噬细胞数量的变化，流式细胞术检测M1和M2型巨噬细胞比例，RT-PCR检测M1 和M2 巨噬细胞标志分子诱导型一氧化氮合酶（iNOS），精氨酸酶1（Arg-1）及炎症因子白细胞介素1β（IL-1β），IL-4，IL-6，IL-10，IL-12，干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和转化生长因子β（TGF-β）mRNA 表达水平。结果 分离培养的MSC 高表达Sca-1，CD29 和CD105，不表达或低表达CD31，CD34，CD45，Ia 和CD11b；成脂诱导分化后，出现大量脂滴，成脂关键转录因子CEBPα 和PPARγ 表达显著增加（P<0.01）；成骨诱导后，碱性磷酸酶活性增加，成骨关键转录因子骨钙素和Runx2 mRNA 表达亦显著增加（P<0.01）。与T1DM 模型组相比，MSC治疗组小鼠随机血糖浓度低（25.0±0.1）%，体质量增加（12.0±0.4）%（P<0.05），胰岛素分泌和巨噬细胞增加，巨噬细胞炎症因子IL-1β，IL-6，IL-12 和TNF-α mRNA 水平显著降低，而IL-10，IL-4 和TGF-β mRNA 水平显著升高（P<0.01）；M2 巨噬细胞百分比从（22.5±4.0）%增至（72.5±3.4）%，Arg-1 mRNA 表达上调（P<0.05）；M1 巨噬细胞百分比从（50.1±1.2）%降至（15.6±1.2）%，iNOS mRNA 表达降低（P<0.05）。结论 MSC移植可减轻T1DM模型小鼠的炎症反应，其机制可能与调控M1 和M2巨噬细胞极化有关。
